[发明专利]一种用于检测BRAF基因的引物、试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种用于检测BRAF基因的引物，其特征在于，所述引物用于扩增BRAF基因目标区域；

所述引物中至少有一个引物上含有可断裂位点和/或可切除序列；

所述可断裂位点包括核糖核苷酸；

所述可切除序列包括RNA序列和/或限制性内切酶识别序列。

2.根据权利要求1所述的用于检测BRAF基因的引物，其特征在于，所述引物的核酸序列包括SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的序列。

3.权利要求1或2所述的用于检测BRAF基因的引物在制备检测BRAF基因的产品中的应用。

4.一种检测BRAF基因突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1或2所述的用于检测BRAF基因的引物；

优选地，所述试剂盒还包括断裂剂、第一接头、第二接头、连接酶和连接酶缓冲液；

优选地，所述断裂剂用于对所述用于检测BRAF基因的引物的扩增产物中的可断裂位点和/或可切除序列进行切割，形成第一粘性末端；

优选地，所述第一接头含有与所述第一粘性末端完全互补配对的第二粘性末端；

优选地，所述第二接头的一端为单碱基突出末端；

优选地，所述单碱基突出末端为T，其位于3’端。

5.根据权利要求4所述的检测BRAF基因突变的试剂盒，其特征在于，所述第一接头为双链核酸分子；

优选地，所述第二粘性末端所在链的5’末端含生物素标记；

优选地，所述第二接头为双链核酸分子，所述单碱基突出末端所在链的5’末端含生物素标记；

优选地，所述第一接头的核酸序列包括SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的序列；

优选地，所述第二接头的核酸序列包括SEQ ID NO:7和SEQ ID NO.8所示的序列；

优选地，所述断裂剂包括RNase H、USER酶或限制性内切酶。

6.一种以非疾病诊断治疗目的的BRAF基因突变检测方法，其特征在于，所述方法包括：

利用权利要求4或5所述的检测BRAF基因突变的试剂盒对样本进行检测。

7.根据权利要求6所述的以非疾病诊断治疗目的的BRAF基因突变检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)利用所述用于检测BRAF基因的引物，对待测序样本中的目标区域进行扩增，得到扩增产物；

(2)将扩增产物与断裂剂、第一接头、第二接头、连接酶和连接酶缓冲液混合，进行切割和连接反应，得文库分子；

(3)扩增文库分子，得到扩增产物；

(4)对扩增产物进行测序，得目标区域的序列信息。

8.根据权利要求6或7所述的以非疾病诊断治疗目的的BRAF基因突变检测方法，其特征在于，所述断裂剂包括RNase H、USER酶或限制性内切酶；

优选地，所述目标区域为BRAF基因的Exon16。

9.一种以非疾病诊断治疗目的的BRAF基因突变检测装置，其特征在于，所述装置利用权利要求4或5所述的检测BRAF基因突变的试剂盒对样本进行检测；

优选地，所述装置包括目标区域扩增单元、文库构建单元、文库扩增单元和文库测序单元；

所述目标区域扩增单元用于执行包括：

利用所述用于检测BRAF基因的引物，对待测序样本中的目标区域进行扩增，得到扩增产物；

所述文库构建单元用于执行包括：

将扩增产物与断裂剂、第一接头、第二接头、连接酶和连接酶缓冲液混合，进行切割和连接反应，得文库分子；

所述文库扩增单元用于执行包括：

扩增文库分子，得到扩增产物；

所述文库测序单元用于执行包括：

对扩增产物进行测序，得目标区域的序列信息。

10.根据权利要求9所述的以非疾病诊断治疗目的的BRAF基因突变检测装置，其特征在于，所述断裂剂包括RNase H、USER酶或限制性内切酶；

优选地，所述目标区域为BRAF基因的Exon16。