[发明专利]异叶青兰中呋喃香豆素类天然自由基清除剂的分离工艺和应用

说明书

本发明公开了异叶青兰中呋喃香豆素类天然自由基清除剂的分离工艺及其应用。具体制备工艺：提取、硅胶柱前处理、微孔树脂柱富集、在线自由基清除剂组分筛选、Diol二醇基柱富集、在线自由基清除剂组分再筛选、反相制备柱制备及反相制备液相色谱纯化。制得的异叶青兰中呋喃香豆素类天然自由基清除剂作为有效成分按药学上或者食品科学上可接受的任何载体制成各类药用制剂或者保健类食品。制备工艺中的提取溶剂、硅胶柱、微孔树脂柱、Diol二醇基柱、反相色谱柱所使用的溶剂及分离材料均可回收利用；原料成本低，甲醇室温冷浸提取，硅胶和微孔树脂分离材料可装于中压柱层析系统中，实现规模化操作；高压色谱分离纯化可以保证产品的纯度大于95％。

技术领域

本发明涉及异叶青兰中天然自由基清除剂分离技术领域，具体涉及异叶青兰中呋喃香豆素类天然自由基清除剂的分离工艺和应用。

背景技术

异叶青兰(Dracocephalum heterophyllum Benth)系唇形科 (Labiatae)青兰属(Dracocephalum)植物，藏药名：“吉孜青保”，又名白花夏枯草，分布于辽宁、内蒙古、河北、山西、甘肃、西藏及青海等地，资源非常丰富。《晶珠本草》中记载异叶青兰治口腔病、牙齿病，清肝热。现代研究证明异叶青兰中的化学成分主要包括苯丙素类、黄酮类、萜类、多糖和木脂素类。文献报道，呋喃香豆素类化合物具有良好的清除自由基活性。为了进一步加快异叶青兰的质量评价和相关新药的研发步伐，有必要从中挖掘更多的活性成分。

目前，有关异叶青兰中呋喃香豆素类天然自由基清除剂的分离制备工艺及其应用并未见文献报道，已有的研究也未做到系统化的研究。因此，亟需建立一种工艺简单、规模化从异叶青兰中分离制备呋喃香豆素类天然自由基清除剂的方法。

发明内容

基于上述技术问题，本发明的目的是提供异叶青兰中呋喃香豆素类天然自由基清除剂的分离工艺和应用。

本发明保护异叶青兰中呋喃香豆素类天然自由基清除剂的分离工艺，具体包括如下步骤：

步骤1，提取：将异叶青兰全草阴干，粗碎后按料液比1g：5～100 mL的甲醇提取，在室温下提取2～4次，每次8～12h，过滤、合并滤液，即滤液A，该滤液A按硅胶的量：异叶青兰药材的量＝1:1～5拌样并减压干燥，即得异叶青兰提取物拌样样品；

步骤2，硅胶柱前处理：异叶青兰提取物拌样样品，该样品经装有硅胶的中压色谱柱分离，经检测波长为210nm的紫外检测器检测，收集制备色谱图中第一个主要的色谱峰馏分，该馏分经减压干燥即得异叶青兰含有目标成分的组分Fr1；其中，所述硅胶柱分离的工作参数为色谱柱柱长460mm、直径15-49mm，固定相为硅胶，流动相A 为甲醇，B为二氯甲烷，色谱条件为0-30min，0％B，30-60min， 0-100％B，60-90min，100％B，进样量为20-130g，流速为10-57 mL/min；

步骤3，微孔树脂柱富集：Fr1用加入其质量5～10倍的甲醇溶解得到滤液B，滤液B按硅胶的量：样品的量＝1:1～1.5拌样并干燥，即得异叶青兰含有目标成分的组分Fr1拌样样品，该样品经装有微孔树脂的中压色谱柱分离，经检测波长为210nm的紫外检测器检测，收集制备色谱图中第四个主要的色谱峰馏分，该馏分经减压干燥即得异叶青兰含有目标成分的组分Fr14；之后取Fr1及Fr11-15样品适量加入甲醇配成50～100mg/mL的甲醇溶液在高效液相色谱仪上进行分析；其中，微孔树脂柱分离的工作参数为：色谱柱柱长460mm、直径15-49mm，微孔树脂柱固定相为CHP20P，流动相A为水，B为甲醇，色谱条件为0-150min，20-100％B，150-210min，100％B，进样量为10-55g，流速为10-57mL/min；HPLC分析条件为：ReproSil-Pur C18 AQ(250×4.6mm，5μm)色谱柱，检测波长为210 nm，流动相A为色谱纯水，流动相B为乙腈溶液，按照0-60min， 40-75％B，流动相流速为1.0mL/min；