[发明专利]一种大叶种巴戟天组培苗快速繁殖的方法及其应用

说明书

本发明公开了一种大叶种巴戟天组培苗快速繁殖的方法及其应用。所述方法包括以下步骤：S1.将新生的大叶种巴戟天藤茎消毒、漂洗，得到外植体；S2.将步骤S1得到的外植体接种至腋芽诱导培养基，诱导培养得到腋芽；S3.将步骤S2得到的腋芽接种至丛生芽诱导培养基中，诱导培养得到丛生芽；S4.将步骤S3得到的丛生芽接种至生根诱导培养基中，诱导培养丛生芽生根，得到大叶种巴戟天组培苗。本发明的方法中利用特定的丛生芽诱导培养基，可以快速诱导培养出大叶种巴戟天组培苗，利用本发明的方法进行诱导，可以诱导出正常丛生芽，且腋芽诱导时间更短、诱导率高，组培苗生根效果好。

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种大叶种巴戟天组培苗快速繁殖的方法及其应用。

背景技术

巴戟天Morindaofficinalis How为茜草科(Rubiaceae)植物。其干燥根可入药，具有强健筋骨、滋补肾阳、祛风除湿的功效，为四大南药之一。巴戟天兼具“药用”及“保健”功效，在我国南方民间被制成各种保健品广泛使用。近年来，随着中医药保健事业的发展，巴戟天作为传统补益类中药也逐渐受到重视。巴戟天目前主要通过扦插繁殖方式进行人工栽培而获得，但长期的无性繁殖为病毒的累积创造了条件，病害等较多，严重影响了巴戟天药材的产量和质量，直接影响药材品质和疗效。因此，如何能够获得高质量、高品质、高产量的巴戟天药材，成为巴戟天研究者首要解决的问题。调研发现：目前主要栽培产地有多种农家品系，如小叶种、大叶种、稼接种等，丁平等发现不同农家类型巴戟天种质资源在分子水平上存在明显的遗传差异，因此，十分有必要针对不同品系的巴戟天进行培育。

研究发现，小叶巴戟天遗传多样性明显高于其他农家类型，可能导致目前栽培巴戟天质量产生变异(丁平,刘瑾,仰铁锤,等.巴戟天遗传多样性的RAPD研究.)。在品种调查及收集中发现大叶种巴戟天具有耐低温、抗旱等生物学特性，特别适合用作巴戟天材料的培养来源，为建立组培体系可以规范品种来源，使研究材料的基因背景一致，为之后研究抗旱、抗寒机制奠定基础；因此十分有必要以大叶种巴戟天为研究对象进行组织培养繁殖的研究，获得大量优质且质量稳定的巴戟天脱毒幼苗，为提高巴戟天药材质量和产业化种植奠定基础。

组织培养技术是获得优质种苗的主要方法，通过组织培养可获得脱毒种苗进行复壮以提高种苗的质量。目前植物组织培养的器官发生途径主要有直接器官发生和间接器官发生，利用较多的为间接器官发生途径，但该方法极易发生变异，导致药用植物再生频率及品质变化较大。而直接器官发生途径由于缺少诱导愈伤组织阶段，相对来说再生周期进一步缩短，且具有极强的遗传稳定性，因此该方法对于保持道地药材质量稳定性具有重要作用。现有技术虽然公开了利用直接器官发生途径进行巴戟天快速组织培养，但是其培养方法并不适用于大叶种巴戟天的快速培育，针对大叶种巴戟天的直接器官发生途径获取组培苗的方法需要进一步研究。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有巴戟天直接器官发生途径无法获得良好大叶种巴戟天组培苗的缺陷和不足，提供一种大叶种巴戟天组培苗快速繁殖的方法及其应用。

本发明的目的在于提供一种大叶种巴戟天组培苗快速繁殖的方法。

本发明的目的还在于提供利用所述方法培养的大叶种巴戟天组培苗。

本发明的目的还在于提供一种利用所述大叶种巴戟天组培苗培育大叶种巴戟天的方法。

本发明以直接器官发生途径为主，以大叶种巴戟天茎段为外植体，诱导得到腋芽，腋芽诱导丛生芽，丛生芽诱导生根获得大叶种巴戟天的组培苗，建立大叶种巴戟天的组培苗快速繁殖体系。

本发明的上述目的通过以下技术手段实现：

本发明提供了一种大叶种巴戟天组培苗快速繁殖的方法，包括以下步骤：

S1.将新生的大叶种巴戟天藤茎消毒、漂洗，得到外植体；

S2.将步骤S1得到的外植体接种至腋芽诱导培养基，诱导培养得到腋芽；