[发明专利]一种麒麟菜降血压六肽、制备方法及其应用

说明书

本发明公开了一种具有血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性的麒麟菜降血压六肽、制备方法及其应用，本发明以麒麟菜为原料，采用超声提取粗蛋白、酶解、超滤、凝胶色谱纯化和反相高效液相色谱制(RP‑HPLC)纯化，得到降血压六肽，本发明制备的麒麟菜降血压六肽具有显著的血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性，且能促进HUVEC细胞中内源性舒张因子(NO)的释放，抑制内皮素(ET‑1)的生成，对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)具有显著的保护作用。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种麒麟菜降血压六肽、制备方法及其应用。

背景技术

高血压(hypertension)是指在静息状态下动脉收缩压大于140mmHg和/或舒张压增高90mmHg，经常伴有心、脑、肾等器官的功用或器质性危害的临床综合征。高血压是最常见的慢性病，也是心脑血管病最主要的风险要素。科学研究表明：脑卒中、冠心病、心力衰竭、肾脏疾病在内的高血压严重并发症致残率和致死率高，已成为我国家庭和社会的沉重负担，而有效预防和控制高血压已成为遏制我国心脑血管疾病流行的核心策略之一。

血管紧张素转换酶(Angiotensin-I-Converting Enzyme，ACE)又称激肽酶Ⅱ或肽基-羧基肽酶，属血管内皮细胞膜结合酶。ACE广泛分布于人体各组织，以附睾、睾丸及肺的含量较丰富，其中肺毛细血管内皮细胞ACE活性最高。它附着于内皮细胞表面可被分解释放入血循环。ACE是血管紧张素系统中的一种关键酶，可以催化血管紧张素Ⅰ转化为具有强大的血管收缩作用的血管紧张素Ⅱ，并且使具有降血压作用的缓激肽失活。因此，ACE抑制剂已被应用于预防和控制高血压。但化学合成的ACE抑制剂具有持续性干咳、皮疹和味觉障碍等不良副作用，使用受到限制。

发明内容

基于此，本发明以食源红藻麒麟菜(Eucheuma muricatum)为原料，利用酶工程技术制备了一种降血压六肽Phe-His-Pro-Ser-Tyr-Met(FHPSYM)，该寡肽显示出显著的降血压效果，可作为药物或者辅助药物用于高血压的治疗。

本发明所要解决的第一个技术问题是针对上述的技术现状提供一种麒麟菜降血压六肽，该降血压六肽的氨基酸序列为Phe-His-Pro-Ser-Tyr-Met(FHPSYM)， ESI-MS测定分子量为766.9Da。该六肽对血管紧张素转化酶(ACE)具有显著的抑制作用，对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)具有显著的保护作用。

本发明所要解决的第二个技术问题是提供一种具有ACE抑制作用的麒麟菜降血压六肽的制备方法。

一种麒麟菜降血压六肽的制备方法，其包括以下步骤：以麒麟菜为原料，经超声提取粗蛋白，后经酶解、超滤、凝胶色谱纯化、RP-HPLC纯化制备得到麒麟菜降血压六肽。

一种麒麟菜降血压六肽的制备方法，具体包括以下步骤：

1)麒麟菜蛋白的制备：取麒麟菜粉末，加入磷酸盐缓冲溶液(0.2M，pH 7.2)，浸泡9～12h后，在频率为53kHz，功率为200W，4℃下超声45～60min，提取液纱布过滤去残渣、滤液8000r/min离心10～15min，取上清液加入硫酸铵固体使之达到100％的饱和度，沉淀45～60min，然后8000r/min离心15～20min，将沉淀加入适量蒸馏水，转移至截留分子量8～14kDa的透析袋，用蒸馏水透析除盐，透析液冻干，得麒麟菜粗蛋白；

2)麒麟菜酶解液的制备：将步骤1)中麒麟菜粗蛋白与甘氨酸-NaOH缓冲液(0.05M)混合，调节混合液pH值至9.0～10.0，调温度至40～45℃，加入碱性蛋白酶，酶解3～5h；酶解液放于沸水种5～10min后，灭酶活；溶液pH值至8.0～8.5，调温度至35～40℃，加入胰蛋白酶，酶解3～5h；酶解液放于沸水种5～10min后，灭酶活，得麒麟菜蛋白酶解液；