[发明专利]一种蛋白组合物、其制备方法及其应用

说明书

本发明的目的是主要提供一种蛋白组合物、其制备方法及应用，所述蛋白组合物包括：如SEQ ID NO:1所示的GP5蛋白；以及，如SEQ ID NO:2所示的GP234蛋白。本发明中，通过将GP234融合蛋白和GP5蛋白复配后，得到的蛋白组合物不仅在使用时安全性良好，且能对猪繁殖与呼吸综合征病毒的NADC30样毒株有很好免疫应答。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种蛋白组合物、其制备方法及其应用。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是一种单股正链RNA囊膜病毒，可引起严重的公猪母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疫病。此外，该病毒可引起宿主较严重的免疫抑制，进而引起机会致病菌等的继发感染，造成较严重的经济损失。

猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组约15kb，其ORF2至ORF7分别编码GP2a、GP3、GP4、GP5、M和N蛋白。此外，在ORF2内还存在一个阅读框编码E蛋白，ORF5内含有阅读框编码GP5a。在病毒囊膜上，含有GP5和M蛋白通过二硫键形成异二聚体，以及GP2a、GP3和GP4形成异三聚体。GP5-M二聚体可能与结合宿主受体CD169有关，而GP2a-GP3-GP4三聚体可结合宿主受体CD163，促进病毒感染。

传统的猪繁殖与呼吸综合征疫苗以减毒活疫苗和灭活疫苗为主。然而，几乎目前市场上很多活疫苗都在使用猪群检测到排毒、散毒，疫苗毒株与野毒株重组等，安全性不理想。而灭活苗诱导的免疫应答难以有效保护感染，甚至会出现抗体依赖性感染增强现象，即病毒在亚中和水平的抗体水平，病毒复制和感染增强。此外，猪繁殖与呼吸综合征病毒基因突变率较高，加上基因重组等，导致该病毒快速变异，这也是传统减毒活疫苗和灭活疫苗效果不佳的重要原因。近年，猪群大范围使用高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗，对高致病性猪繁殖与呼吸综合征预防和控制起到了一定程度作用。随着猪繁殖与呼吸综合征病毒在田间的变异和重组，近年NADC30样毒株逐步成为优势毒株。然而，高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗对NADC30样毒株的保护有限。

发明内容

本发明的目的是主要提供一种蛋白组合物、其制备方法及其应用，旨在提供一种对于NADC30样毒株有好的免疫效果且安全性强的蛋白组合物。

为达到上述目的，本发明提供一种蛋白组合物，所述蛋白组合物包括：

如SEQ ID NO:1所示的GP5蛋白；以及，

如SEQ ID NO:2所示的GP234蛋白。

可选地，所述GP5蛋白的编码基因如SEQ ID NO:3所示；和/或，

所述GP234蛋白的编码基因如SEQ NO.4所示。

可选地，所述GP5蛋白与所述GP234蛋白的质量比为1:(1～3)。

此外，本发明提供一种制备上述蛋白组合物的方法，所述制备蛋白组合物的方法包括以下步骤：

获取如SEQ ID NO:1所示的GP5蛋白；

获取如SEQ ID NO.2所示的GP234蛋白；

将所述GP5蛋白与所述GP234蛋白进行复配，得到所述蛋白组合物。

可选地，所述制备如SEQ ID NO:1所示的GP5蛋白的步骤包括：

采用GP5扩增引物对以GP5蛋白的编码基因为模板进行克隆，得到含有酶切位点的GP5基因扩增片段，其中，所述GP5蛋白的编码基因如SEQ ID NO:3所示；

将所述GP5基因扩增片段与GP5载体质粒进行连接，得到GP5连接产物，将所述GP5连接产物导入GP5感受态细胞，得到GP5重组菌株；

将GP5重组菌株进行诱导表达后，得到所述GP5诱导表达菌株；