[发明专利]一种GP234重组蛋白、编码其的基因、生产载体、制备方法及其应用

说明书

本发明提供一种GP234重组蛋白、编码其的基因、生产载体、制备方法及其应用，所述GP234重组蛋白具有GP234蛋白活性部，其所述GP234蛋白活性部如SEQ ID NO：1所示。本发明中，将GP2、GP23、GP4蛋白与铁蛋白融合，并进行密码子优化，使得其重组蛋白不依赖于病毒载体进行生产，提高了产量，以及后续使用和生产的安全性。与此同时，经实验验证，本发明的重组蛋白能对于引发生物体对于猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫性应答有良好的效果。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种GP234重组蛋白、编码其的基因、生产载体、制备方法及其应用。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是一种单股正链RNA囊膜病毒，可引起严重的公猪母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疫病。此外，该病毒可引起宿主较严重的免疫抑制，进而引起机会致病菌等的继发感染，造成较严重的经济损失。

猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组约15kb，其ORF2至ORF7分别编码GP2a、GP3、GP4、GP5、M和N蛋白。此外，在ORF2内还存在一个阅读框编码E蛋白，ORF5内含有阅读框编码GP5a。在病毒囊膜上，含有GP5和M蛋白通过二硫键形成异二聚体，以及GP2a、GP3和GP4形成异三聚体。GP5-M二聚体可能与结合宿主受体CD169有关，而GP2a-GP3-GP4三聚体可结合宿主受体CD163，促进病毒感染。

GP2、GP3、GP4融合蛋白的体外制备对于生产猪繁殖与呼吸综合征病毒基因疫苗有很大的应用前景，而GP2、GP3、GP4均为膜蛋白，这使得现今生产出的蛋白往往只能依靠腺病毒、杆病毒等病毒载体进行生产，这种制备方法虽然可以使融合蛋白表达。但是，由于蛋白本身导致制备方法的限制，不仅产量过低，而且由于采用病毒载体，也存在着安全性欠佳的问题。

发明内容

本发明的主要目的是提供一种GP234重组蛋白、编码其的基因、生产载体、制备方法及其应用，旨在提供不限于病毒载体就可表达的蛋白，以此，提高蛋白的产量和使用及生产上的安全性。

为达到上述目的，本发明提供一种GP234重组蛋白，所述GP234重组蛋白具有GP234蛋白活性部，其所述GP234蛋白活性部如SEQ ID NO：1所示。

可选地，所述GP234重组蛋白还具有与所述GP234蛋白活性部的N端和/或C端连接的标签蛋白。

可选地，所述标签蛋白连接在所述GP234蛋白活性部的C端，且所述GP234重组蛋白的序列如SEQ ID NO：2所示。

此外，本发明还提供一种编码上述GP234重组蛋白基因，所述编码基因序列如SEQID NO：3所示。

此外，本发明还提供一种含有上述编码基因的生物载体，所述生物载体包括质粒或工程菌。

此外，本发明还提供一种制备上述GP234重组蛋白的方法，所述制备GP234重组蛋白的方法包括以下步骤；

构建含有编码所述GP234蛋白活性部基因的重组质粒；

将所述重组质粒转入感受态细胞，并进行诱导表达，得到GP234表达菌株；

从所述GP234表达菌株中提取表达蛋白，得到所述GP234重组蛋白。

可选地，所述构建含有编码所述GP234蛋白活性部基因的重组质粒的步骤包括：

采用GP234扩增引物对以所述GP234蛋白的编码基因为模板进行克隆，得到含有酶切位点的GP234基因扩增片段，其中，所述GP234蛋白的序列如SEQ ID NO:3所示；

将所述GP234基因扩增片段连接至载体质粒，得到所述重组质粒。

可选地，所述GP234扩增引物对如SEQ ID NO：4～5所示；和/或，