[发明专利]一种毛霉菌特异性PCR检测引物组及其应用在审
| 申请号： | 202210803530.4 | 申请日： | 2022-07-07 |
| 公开（公告）号： | CN115838819A | 公开（公告）日： | 2023-03-24 |
| 发明（设计）人： | 刘维达;梁官钊;张美洁;梅嬛 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院皮肤病医院（中国医学科学院皮肤病研究所） |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12N15/11;C12Q1/6883;C12Q1/686;C12R1/785 |
| 代理公司： | 苏州铭浩知识产权代理事务所(普通合伙) 32246 | 代理人： | 于浩江 |
| 地址： | 210000 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 毛霉 特异性 pcr 检测 引物 及其 应用 | ||
1.一种毛霉菌特异性PCR检测引物组，其特征在于：
基于毛霉目真菌特异性片段hmgR3的基因序列设计一对PCR扩增引物组：
上游引物5’-TTGATCGGCTCTGCTATG-3’；
下游引物5’-ATGAGGACCACGAACACC-3’；
通过PCR扩增可在毛霉目真菌菌种中得到特异性的270bp条带。
2.如权利要求1所述的毛霉菌特异性PCR检测引物组的应用，其特征在于：应用在毛霉病患者的临床检测中。
3.根据权利要求2所述的毛霉菌特异性PCR检测引物组的应用，其特征在于，包含以下步骤：
①提取丝状真菌样本DNA；
②以步骤①中提取的DNA为模板，对PCR扩增引物组进行PCR；
③对PCR扩增产物进行检测。
4.根据权利要求3所述的毛霉菌特异性PCR检测引物组的应用，其特征在于：所述步骤①中丝状真菌碾磨破壁后，采用试剂盒(OMEGA FUNGAL DNA KIT1000)对样本基因组DNA进行提取。
5.根据权利要求3所述的毛霉菌特异性PCR检测引物组的应用，其特征在于：所述步骤②中PCR采用TransStart Fastpfu DNA Polymerase，20μl反应体系：其中5×FastPfuBuffer 4μl，2.5mM dNTPs 2μl，5μM上游引物0.8μl，5μM下游引物0.8μl，FastPfuPolymerase 0.4μl，DNA模板10ng，ddH2O补至20μl。
6.根据权利要求3所述的毛霉菌特异性PCR检测引物组的应用，其特征在于：所述步骤②中PCR扩增程序为：95℃预变性5min，95°C变性30s，55℃退火20s，72℃延伸45s，共35个循环，72℃
延伸10min。
7.根据权利要求3-6中任一项权利要求所述的毛霉菌特异性PCR检测引物组的应用，其特征在于：所述步骤③中检测步骤为：用2％琼脂糖凝胶电泳检测纯化后PCR扩增产物。
8.根据权利要求3所述的毛霉菌特异性PCR检测引物组的应用，其特征在于：所述步骤③中PCR能扩增出270bp的特异性条带，则说明检测样本存在毛霉菌感染，检测组织来源存在毛霉病情况。
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