[发明专利]一种褐藻酸裂解酶突变体及其制备方法与应用以及一种重组表达载体和重组表达菌株在审
| 申请号： | 202210814309.9 | 申请日： | 2022-07-12 |
| 公开（公告）号： | CN115806963A | 公开（公告）日： | 2023-03-17 |
| 发明（设计）人： | 杨登峰;张秀;潘丽霞;李红亮;阳丽艳;黄艳冰;李娟 | 申请（专利权）人： | 广西科学院 |
| 主分类号： | C12N9/88 | 分类号： | C12N9/88;C12N15/60;C12N15/70;C12N15/66;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京睿智保诚专利代理事务所(普通合伙) 11732 | 代理人： | 马欢欢 |
| 地址： | 530007 广*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 褐藻 裂解 突变体 及其 制备 方法 应用 以及 重组 表达 载体 菌株 | ||
1.一种褐藻酸裂解酶突变体，其特征在于，包括褐藻酸裂解酶突变体FlAlyA-H71K或褐藻酸裂解酶突变体FlAlyA-H176D；
所述褐藻酸裂解酶突变体FlAlyA-H71K的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示；
编码所述褐藻酸裂解酶突变体FlAlyA-H71K的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；
所述褐藻酸裂解酶突变体FlAlyA-H176D的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示；
编码所述褐藻酸裂解酶突变体FlAlyA-H176D的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。
2.一种权利要求1所述褐藻酸裂解酶突变体的制备方法，其特征在于，所述褐藻酸裂解酶突变体FlAlyA-H71K的制备方法为：将褐藻酸裂解酶FlAlyA的第71位氨基酸进行突变得到褐藻酸裂解酶突变体FlAlyA-H71K；
所述褐藻酸裂解酶突变体FlAlyA-H176D的制备方法为：将褐藻酸裂解酶FlAlyA的第176位氨基酸进行突变得到褐藻酸裂解酶突变体FlAlyA-H176D。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述褐藻酸裂解酶FlAlyA的第71位氨基酸为组氨酸；
所述褐藻酸裂解酶突变体FlAlyA-H71K的第71位氨基酸为赖氨酸；
所述褐藻酸裂解酶FlAlyA的第176位氨基酸为组氨酸；
所述褐藻酸裂解酶突变体FlAlyA-H176D的第176位氨基酸为天冬氨酸。
4.一种重组表达载体，其特征在于，包括编码权利要求1所述褐藻酸裂解酶突变体FlAlyA-H71K或FlAlyA-H176D的核苷酸序列以及空载载体pET22b(+)。
5.权利要求4所述的重组表达载体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将编码权利要求1所述褐藻酸裂解酶突变体FlAlyA-H71K或FlAlyA-H176D的核苷酸序列与pET22b(+)连接，得到重组表达载体；
所述连接的位点为限制性内切酶Nde I和Xho I双酶切后的位点。
6.一种重组表达菌株，其特征在于，包括权利要求4所述重组表达载体以及出发菌株；
所述出发菌株为大肠杆菌BL21-CodonPlus-RIL。
7.权利要求6所述的重组表达菌株的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将权利要求4所述的重组表达载体导入出发菌株中，诱导表达得到重组表达菌株。
8.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述诱导的诱导剂为异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)；
所述异丙基-β-D-硫代半乳糖苷的终浓度为0.1mM；
所述诱导的温度为23～27℃；
所述诱导的时间为22～26h。
9.权利要求1所述褐藻酸裂解酶突变体在制备热稳定性高的产品方面的应用。
10.权利要求4所述重组表达载体或权利要求6所述重组表达菌株在制备热稳定性高的产品方面的应用。
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