[发明专利]重组蛋白、重组蛋白偶联磁珠、制备方法、试剂盒及用途

权利要求书

1.一种重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白为AHSG重组蛋白；所述AHSG重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，编码所述AHSG重组蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种权利要求1所述重组蛋白的制备方法，其特征在于，包括：

将SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列连接重组载体，构建重组蛋白表达载体；

将重组蛋白表达载体转化E.coli DH5α大肠杆菌感受态细胞培养，获得重组蛋白表达菌株，从重组蛋白表达菌株中提取质粒，转化DH10bac感受态细胞进行蓝白斑筛选；

从白色单菌斑摇菌提取Bacmid杆粒，并将提取到的重组杆粒转进sf9昆虫细胞，进行大规模培养；

收集细胞上清，纯化，得到重组蛋白。

3.如权利要求2所述重组蛋白的制备方法，其特征在于，将重组蛋白表达载体转化E.coli DH5α大肠杆菌感受态细胞培养，获得重组蛋白表达菌株，从重组蛋白表达菌株中提取质粒，转化DH10bac感受态细胞进行蓝白斑筛选；包括：

将重组蛋白表达载体转化DH10bac大肠杆菌感受态细胞培养后，挑取白斑单菌落进行PCR验证，筛选出阳性单克隆，随后进行Bacmid杆粒提取。

4.如权利要求3所述重组蛋白的制备方法，其特征在于，挑选白斑进行PCR验证时所用的正向引物为通用引物M13F：CCCAGTCACGACGTTGTAAAACG，M13R：AGCGGATAACAATTTCACACAGG。

5.如权利要求2-4任意一项所述重组蛋白的制备方法，其特征在于，所述重组载体为杆状病毒表达载体pFastBac^TMDual。

6.一种重组蛋白偶联磁珠，其特征在于，由权利要求1所述重组蛋白或权利要求2-4任意一项所述制备方法制得的重组蛋白与磁微粒偶联得到。

7.一种权利要求6所述重组蛋白偶联磁珠的制备方法，其特征在于，包括：

取磁珠原液于尖头离心管内分离去上清；

将去上清后的磁珠原液置于离心管中并加入包被缓冲液洗涤，洗涤后于离心管内加入一定量包被缓冲液；

将EDC、AHSG重组蛋白和硫酸铵依次加入离心管混匀反应，反应后取出磁珠，去上清；

将反应后的磁珠与封闭液混匀反应，反应后依次用封闭液、磁珠保护液洗涤，洗涤后用磁珠保护液定容，得到重组蛋白偶联磁珠。

8.如权利要求7所述重组蛋白偶联磁珠的制备方法，其特征在于，将EDC、AHSG重组蛋白和硫酸铵依次加入离心管混匀反应，反应后取出磁珠，去上清；包括：

将EDC、AHSG重组蛋白和硫酸铵依次加入离心管混匀在37℃反应3h后取出磁珠，去上清；

将反应后的磁珠与封闭液混匀反应，反应后依次用用封闭液、磁珠保护液洗涤，洗涤后用磁珠保护液定容，得到重组蛋白偶联磁珠；包括：

将反应后的磁珠与封闭液混匀在37℃反应3h后依次用用封闭液、磁珠保护液洗涤，洗涤后用磁珠保护液定容，得到重组蛋白偶联磁珠。

9.一种试剂盒，其特征在于，包括权利要求6所述重组蛋白偶联磁珠或权利要求7-8任意一项所述制备方法制备得到的重组蛋白偶联磁珠。

10.一种权利要求1所述重组蛋白或权利要求2-4任意一项所述制备方法制得的重组蛋白用于制备检测人血中抗AHSG抗体试剂或试剂盒的用途。