[发明专利]重组蛋白、重组蛋白偶联磁珠、制备方法、试剂盒及用途

说明书

本发明实施例提供一种重组蛋白、制备方法、试剂盒及用途，所述重组蛋白为AHSG重组蛋白；所述AHSG重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，编码所述AHSG重组蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。制备方法包括：将SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列连接重组载体，构建重组蛋白表达载体；将重组蛋白表达载体转化E.coli DH5α大肠杆菌感受态细胞培养，获得重组蛋白表达菌株，从重组蛋白表达菌株中提取质粒，转化DH10bac感受态细胞进行蓝白斑筛选；从白色单菌斑摇菌提取Bacmid杆粒，并将提取到的重组杆粒转进sf9昆虫细胞，进行大规模培养；收集细胞上清，纯化，得到重组蛋白。本发明实施例通过异源重组表达AHSG蛋白，能迅速并且特异性识别人血中抗AHSG抗体，实现定量检测。

技术领域

本发明涉及一种重组蛋白、制备方法、试剂盒及用途。

背景技术

不孕不育是全世界关注的人类自身生殖健康问题。阻碍受孕的因素有女性、男性或男女双方，据统计女性因素占60％，男性因素占30％，男女双方因素占10％。总发病率10％-15％。据估算，全球共有4800万对夫妇和1.86亿人患不孕不育症。男性生殖系统最常见不育因素是精液喷射、精子缺失或太少，或精子形态和动能异常。女性生殖系统不孕可由卵巢、子宫、输卵管和内分泌系统等一系列异常引起。不孕不育症可以是原发性的，也可以是继发性的。原发不孕不育为从未受孕，继发不孕不育为曾经怀孕以后又不孕。

抗子宫内膜抗体(EMΑb)是一种以子宫内膜为靶抗原，并引起一系列免疫病理反应的自身抗体。它可以和子宫内膜中的抗原结合，发生抗原抗体反应，激活补体系统，使子宫内膜腺体功能受损，导致营养胚胎的糖原分泌不足，干扰和妨碍受精卵的着床和胚囊的发育，造成不孕及早期流产。其中，α2-HS糖蛋白(αlphα2-Heremαns-Schmid glycoprotein，α烯醇化酶)是一种存在于健康人体血清中具有高度遗传多态性的糖蛋白，由349个氨基酸残基编码两条多肽链组成，主要由肝脏合成，后储存、富集于骨组织中。其基因染色体定位于3q27，由7个外显子组成，横跨8.2kb基因组DNΑ，cDNΑ长度为1 104bp，有AHSG1、AHSG2两个等位基因，在等电聚焦中展现其多态性，和PP63属于同源基因。

抗子宫内膜抗体(EMΑb)在女性免疫性不孕的病因中占有重要位置，常见于不孕、流产、子宫内膜异位症(EMT)患者。EMΑb的检测方法主要有间接免疫荧光法(IF)、双向免疫扩散法(ID)、间接血凝法(PHΑ)与酶联免疫吸附检测法(ELISΑ)。IF法需刮宫内膜制备抗原片，并需一定设备，不易普及开展；ID、PHΑ和ELISΑ只需取患者外周血检查，应用较为普遍。国内仅见用子宫内膜匀浆为抗原作ID法报告，灵敏度与特异性均不高。也有实验室采用胶原酶-分样筛-亲和层析等综合步骤提取、纯化人子宫内膜抗原，建立ELISΑ间接法测定不孕、流产患者血清中EMΑb。

发明内容

本发明实施例提供一种重组蛋白、制备方法、试剂盒及用途，以通过异源重组表达AHSG蛋白实现人血中抗AHSG抗体的定量检测。

本发明实施例的目的通过下述技术方案实现：

第一方面，本发明实施例提供一种重组蛋白，所述重组蛋白为AHSG重组蛋白；所述AHSG重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，编码所述AHSG重组蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

第二方面，本发明实施例提供一种所述重组蛋白的制备方法，包括：

将SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列连接重组载体，构建重组蛋白表达载体；

将重组蛋白表达载体转化E.coli DH5α大肠杆菌感受态细胞培养，获得重组蛋白表达菌株，从重组蛋白表达菌株中提取质粒，转化DH10bac感受态细胞进行蓝白斑筛选；

从白色单菌斑摇菌提取Bacmid杆粒，并将提取到的重组杆粒转进sf9昆虫细胞，进行大规模培养；