[发明专利]用于CPSI和AIV二重荧光定量PCR检测的引物探针组、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种用于CPSI和AIV二重荧光定量PCR检测的引物探针组，其特征在于，包括针对CPSI的引物探针组和针对AIV的引物探针组；其中，

所述针对CPSI的引物探针组包括：SEQ ID NO.1所示的CPSI F引物、SEQ ID NO.2所示的CPSI R引物和SEQ ID NO.3所示的CPSI Pb探针；

所述针对AIV的引物探针组包括：SEQ ID NO.4所示的AIV F引物、SEQ ID NO.5所示的AIV R引物和SEQ ID NO.6所示的AIV Pb探针。

2.一种用于CPSI和AIV二重荧光定量PCR检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：CPSI/AIV二重反应液、CPSI/AIV二重阳性对照、阴性对照、核酸扩增反应液、RT-PCR酶混液和内标溶液；其中，

所述CPSI/AIV二重反应液包括：如权利要求1所述的针对CPSI的引物探针组和针对AIV的引物探针组，以及RNA内标的引物探针组和DNA内标的引物探针组。

3.如权利要求2所述的用于CPSI和AIV二重荧光定量PCR检测的试剂盒，其特征在于，所述RNA内标的引物探针组包括：SEQ ID NO.7所示的IC F引物、SEQ ID NO.8所示的IC R引物和SEQ ID NO.9所示的IC Pb探针；

所述DNA内标的引物探针组包括：SEQ ID NO.10所示的M-IC F引物、SEQ ID NO.11所示的M-IC R引物和SEQ ID NO.12所示的M-IC Pb探针。

4.如权利要求3所述的用于CPSI和AIV二重荧光定量PCR检测的试剂盒，其特征在于，所述针对CPSI的引物探针组中，所述CPSI F引物、所述CPSI R引物和所述CPSI Pb探针的纳摩尔比为(350～400)：(350～400)：200；

和/或，所述针对AIV的引物探针组中，所述AIV F引物、所述AIV R引物和所述AIV Pb探针的纳摩尔比为(350～400)：(350～400)：200；

和/或，所述RNA内标的引物探针组中，所述IC F引物、所述IC R引物和所述IC Pb探针的纳摩尔比为(350～400)：(350～400)：(350～400)；

和/或，所述DNA内标的引物探针组中，所述M-IC F引物、所述M-IC R引物和所述M-ICPb探针的纳摩尔比为(350～400)：(350～400)：(350～400)。

5.如权利要求2～4任一项所述的用于CPSI和AIV二重荧光定量PCR检测的试剂盒，其特征在于，所述核酸扩增反应液包括：10×PCR Buffer、dNTPs和MgCl₂；

和/或，所述RT-PCR酶混液包括：热启动Taq DNA聚合酶和耐热型M-MLV反转录酶；

和/或，所述阴性对照采用无核酸酶水；

和/或，所述CPSI/AIV二重阳性对照包括：含有CPSI靶基因序列的重组质粒PUC57-CPSI、含有AIV靶基因序列的重组质粒PAR-AIV、含有内标序列的重组质粒PAR-IC与噬菌体λDNA；

和/或，所述内标溶液包括假病毒RNA内标和噬菌体λDNA内标。

6.如权利要求5所述的用于CPSI和AIV二重荧光定量PCR检测的试剂盒，其特征在于，所述重组质粒PUC57-CPSI的序列信息如SEQ ID NO.13所示，所述重组质粒PAR-AIV的序列信息如SEQ ID NO.14所示，所述重组质粒PAR-IC的序列信息如SEQ ID NO.15所示；

和/或，所述假病毒RNA内标由表达质粒pAR-IC经过质粒转化、诱导表达、转录、组装成假病毒、细胞裂解、病毒纯化和稀释制得；所述表达质粒pAR-IC的序列信息如SEQ ID NO.15所示。