[发明专利]用于CPSI和AIV二重荧光定量PCR检测的引物探针组、试剂盒及方法

说明书

本申请属于分子生物学技术领域，尤其涉及一种用于CPSI和AIV二重荧光定量PCR检测的引物探针组、试剂盒及方法。其中，引物探针组包括针对CPSI的引物探针组包括：SEQ ID NO.1所示的CPSI F引物、SEQ ID NO.2所示的CPSI R引物和SEQ ID NO.3所示的CPSI Pb探针；以及针对AIV的引物探针组包括：SEQ ID NO.4所示的AIV F引物、SEQ IDNO.5所示的AIV R引物和SEQ ID NO.6所示的AIV Pb探针。本申请引物探针组可用于微量的CPSI和AIV二重荧光定量PCR检测，可同时检测出鹦鹉热衣原体和禽流感病毒，特异性强，灵敏度高。

技术领域

本申请属于分子生物学技术领域，尤其涉及一种用于CPSI和AIV二重荧光定量PCR检测的引物探针组、试剂盒及方法。

背景技术

鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci，Cpsi)可引起人、鸟类，以及其他动物患鹦鹉热，造成多器官的病变，对宿主产生巨大的影响。近年来，由Cpsi引起的疾病在我国多地区发现。不仅在许多鸟类及家禽中发现，对养殖业造成巨大的影响，同时对接触带菌鸟禽的人群造成威胁，导致了不少的人患病，甚至造成了患者死亡，产生严重的后果。鹦鹉热衣原体全基因序列在1.17Mp左右，基因组位于一个环状的染色体上，GC％含量为39.1％，1026个基因和973个蛋白质，并且拥有一个约7.5kbp的环状质粒，相对于病毒，更接近于细菌。根据ompA基因序列不同，Cpsi可分为15种基因型，其中基因型A型和D型为强毒力株，能够引起鸟类的急性感染型，A型还是感染人类的常见基因型，常在鹦鹉中检出。鹦鹉热衣原体引起的鹦鹉热是一种人畜共患病，人畜共患疾病的预防、发生和发展越来越受到人们的重视。

禽流感(Avian Influenza，AI)是由正黏病毒科A型流感病毒(Avian InfluenzaVirus，AIV)引起的一种禽类(家禽和野禽)的烈性传染性疾病或疾病综合征，已经成为危害世界养禽业最重要的传染性疫病之一，尤其是高致病性禽流感(High Pathogenic AvianInfluenza，HPAI)曾被世界动物卫生组织(OIE)列为A类传染病，现被列为跨国境传播的法定通报传染病，并被列入国际生物武器公约动物类传染病名单。根据禽流感病毒表面基因血凝素(hemagglutinin，HA)和神经氨酸酶(neuraminidase，NA)不同，可将禽流感病毒(AIV)分为16种HA亚型(H1～H16)和9种NA亚型(N1～N9)。迄今为止，自然发生的HPAI仅与H5和H7亚型有关，以突然发病和高死亡率为特征，传染性极强，可引起家禽全身性感染，致死率达100％，危害极大，亦可引起的人的急性呼吸道传染病，不仅对养畜业带来灾难性的破坏，而且对公共健康造成了严重破坏。

目前，针对Cpsi和AIV的检测方法多样，血清学方面有补体结合试验、酶联免疫吸附实验(ELISA)、间接免疫荧光实验等。但血清学检测与其他衣原体存在交叉，常需要检测两个病程的血清，因此仅靠单次采集血清样本检测不足以确认。传统衣原体的分离采用鸡胚培养法，但随着分子生物技术的发展，正逐步向相对敏感和操作简便的细胞培养法转化。细胞培养法被公认为是衣原体检测的标准方法之一。最近几年，临床上使用宏基因组检测(mNGS)可以快速诊断疾病，但目前，mNGS存在费用昂贵，无法获取全基因组序列的弊端，仅在临床中某些难以诊断的疾病中使用。PCR检测技术随着时代进步，技术不断优化，并与其他技术结合使用可获得更高的特异性和灵敏度。近年来，PCR技术在Cpsi或AIV的检测诊断中应用越来越多，但关于同时能鉴别鹦鹉热衣原体和禽流感病毒的二重荧光PCR检测方法还未见报道。

发明内容

本申请的目的在于提供一种用于CPSI和AIV二重荧光定量PCR检测的引物探针组、试剂盒及方法，旨在提供能同时鉴别鹦鹉热衣原体和禽流感病毒的二重荧光定量PCR检测技术。

为实现上述申请目的，本申请采用的技术方案如下：

第一方面，本申请提供一种用于CPSI和AIV二重荧光定量PCR检测的引物探针组，包括针对CPSI的引物探针组和针对AIV的引物探针组；其中，