[发明专利]一种甘蔗组培脱毒方法

说明书

本发明提供一种甘蔗组培脱毒方法，本发明方法通过抗病毒药剂的浸泡降低了甘蔗原种苗带毒量，结合传统的温水脱毒，有效的降低了脱毒种苗中的带毒率，同时对组培苗多次茎尖脱毒，可大大的减少脱毒过程中原种茎的使用量，多次脱毒的效果也大大优于一次脱毒的效果，线条花叶病的脱毒效率可以达到20％，脱毒的周期缩短约50％，成苗时间为60天左右。改善了甘蔗茎尖脱毒成苗困难的情况，突破了甘蔗常规脱毒方法线条花叶病和宿根矮化病难以脱除的技术瓶颈。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种甘蔗组培脱毒方法。

背景技术

甘蔗花叶病(Sugarcane mosaic virus,SCMV)和宿根矮化病(Ratoon StuntingDisease, RSD)是重要的世界性甘蔗病害。在我国福建、广东、广西、四川和浙江等主要蔗区普遍发生。甘蔗在种植过程中感染甘蔗花叶病和宿根矮化病而引起品种种性退化，直接影响了甘蔗的品质及产量，严重阻碍了甘蔗的生产和利用。甘蔗组培脱毒技术是解决甘蔗种性退化的主要技术措施。因此，甘蔗脱毒种苗越来越受到广大甘蔗栽培者的欢迎。我国在甘蔗茎尖组培脱毒方面也取得了很多研究成果，建成了组培脱毒苗的繁育产业化技术体系。甘蔗茎尖组织培养脱毒技术是甘蔗脱毒苗产业化的基础，优质快速的茎尖组培脱毒技术为甘蔗新品种脱毒苗和脱毒苗的生产赢得了时间和效益。通过组织培养途径，建立脱毒种苗生产体系是目前非常有效的控制甘蔗花叶病和宿根矮化病的重要方法。

目前还少有抗病毒药剂在甘蔗组培脱毒方面的应用研究，而在甘蔗种苗脱毒方法上常用一次茎尖脱毒，但切取的茎尖小，成活率低，很难达到一次脱毒成功的效果。导致使用的种苗原材料量大，而脱毒效率低下，工作量大但脱毒效率低。同时茎尖脱毒过程中大多使用分化培养的方法，1-3mm的茎尖在分化培养基中，出苗的速度慢，成活率低。

因此本方法提出一方面甘蔗材料的前期加强营养管理，另一方面使用抗病毒药剂以减少材料的带毒量。同时在组培苗阶段进行多次茎尖脱毒处理，大大的提高了甘蔗组培苗的脱毒效率，大大减少了原种苗的使用量

发明内容

本发明的目的在于提供一种甘蔗组培茎尖脱毒效率高、成苗率和脱毒效率均比较高的甘蔗茎尖脱毒方法。

为解决上述的技术问题，本发明采用以下技术方案：一种甘蔗组培脱毒方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)：用于脱毒的甘蔗种原材料种植于水肥条件较好的地块，加强水肥管理，甘蔗种原材料生长充分，从田间选择生长健壮的甘蔗植株，选取中段成熟茎节作为脱毒的材料；

(2)：选取步骤(1)中的茎节作为脱毒的材料，茎节的芽选择成熟饱满的芽，茎节切成三至五个芽一段，放于恒温水浴锅中；

(3)：步骤(2)温水处理过的甘蔗种茎，切成单芽后浸泡于抗病菌药液泡种10分钟，38-42℃恒温催芽1周；

(4)：步骤(3)中恒温催芽得到10cm的芽，在无菌的超净工作台中切取1-3mm茎尖，接种于MS液体培养基中，培养出愈伤组织，分化出试管苗；

(5)：步骤(4)中的试管苗经过分化长出10-30个芽后，转入生根培养基中培养15天，可再次切取茎尖分生组织，接种于液体培养基中，培养出愈伤组织，分化出新的试管苗；

(6)：步骤(5)根据品种和PCR检测的结果，带毒的试管苗重复进行茎尖脱毒培养；步骤(4)和(5)中获得的试管苗取叶片进行病毒的检测；通过甘蔗花叶病和宿根矮化病的检测，分离出不带病毒的健康组培种苗单株，并通过组培快繁的方法大量繁育出甘蔗的健康种苗，推广应用于甘蔗种植区。

进一步的；所述步骤(2)中，放于恒温水浴锅中的温度为52-58℃，温水浸泡时间为30-120min。