[发明专利]氢化酶的表达载体组合、重组菌、酶组合物及其应用

权利要求书

1.氢化酶的表达载体组合，包括第一表达载体和第二表达载体；

所述第一表达载体以pM1作为骨架质粒，插入有hoxW基因表达盒、hoxN1基因表达盒和hypA2B2C1D1E1F2X基因表达盒；

所述第二表达载体以pSH6作为骨架质粒，插入有hoxFUYHI₂基因表达盒。

2.一种重组菌，含有权利要求1所述表达载体组合。

3.一种氢化酶的制备方法，包括以下步骤：

将权利要求2所述重组菌接种于M9优化培养基，进行诱导表达，得到诱导表达的菌液；对所述菌液进行裂解，得到裂解液，所述裂解液中含有氢化酶；

所述M9优化培养基以M9培养基为基础培养基，还包括以下浓度的组分：50mg/L卡那霉素、50mg/L壮观霉素、质量体积分数为0.5％～2％的葡萄糖、体积分数为0.5％～6％的甘油、质量体积分数为0.5％～6％的乳糖、1～200μMNiCl₂、1～200μM柠檬酸铁铵、1～200μM核黄素和体积分数为1％～10％的LB培养基。

4.权利要求1所述的表达载体组合或者权利要求2所述重组菌或者利用权利要求3所述制备方法制备得到的氢化酶在合成NADH中的应用。

5.一种酶组合物，包括利用权利要求3所述制备方法制备得到的氢化酶、甲醛脱氢酶、甲醛酶和甘油脱氢酶。

6.根据权利要求5所述的酶组合物，其特征在于，还包括甲酸脱氢酶。

7.权利要求5或6所述的酶组合物在对一碳化合物进行增值中的应用，所述对一碳化合物进行增值优选的包括利用一碳化合物合成甘油。

8.一种利用一碳化合物合成甘油的方法，包括以下步骤：

将一碳化合物、MgSO₄、TPP、NAD+和权利要求5或6所述酶组合物混合，进行酶级联催化反应，得到甘油。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述酶级联催化反应的反应体系以浓度为100mM的磷酸钠缓冲液作为反应体系缓冲液，所述反应体系含有以下浓度的组分：1～5mMMgSO₄、0.1～1mM TPP、0.6～1.2mM NAD+、0.25～1U/ml FateDH、0.1～0.5U/ml FaldDH、0.05～0.5mg/ml GLDH、0.05～0.5mg/ml的FLS-M3和0.2～0.8mg/ml的SH氢化酶；所述磷酸钠缓冲液的pH＝7.5～8.0。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述酶级联催化反应的反应温度为15～26℃，反应过程中通入H₂，通入H₂的流速为20～200ml/min，反应时间为15min～12h。