[发明专利]一种酵母源饲料中谷胱甘肽含量的测定方法

权利要求书

1.一种酵母源饲料中谷胱甘肽含量的测定方法，其特征在于，主要包括以下几个方面：

一、仪器准备，包括：

（1）高效液相色谱仪（配备柱温箱)；

（2）流动相真空抽脱气装置及0.45um 滤膜；

（3）色谱柱；

（4）分析天平，精度0.1mg；

（5）微量进样器；

二、试剂准备，包括：

（1）水；

（2）乙腈，色谱纯；

（3）还原型谷胱甘肽标准品；

（4）磷酸二氢钠；

（5）辛烷磺酸钠；

三、含量测定，包括以下步骤：

（1）标准溶液的配制；

（2）样液的制备；

（3）色谱条件；

（4）绘制标准曲线；

（5）样品的测定

对于含量测定中样品的测定，将制备好的样液进样，根据标准品的保留时间定性样品中的还原型谷胱甘肤的色谱峰；

（6）结果计算

根据样品的峰面积，计算谷胱甘肽组分的含量；

（7）精密度

在重复性条件下获得两次测定结果的绝对差值应不超过算术平均值的10%。

2.根据权利要求1所述的一种酵母源饲料中谷胱甘肽含量的测定方法，其特征在于：对于仪器准备中的色谱柱，选用C18柱，其填料粒径为5μm，柱尺寸为4.6mmx250mm 或分析效果相似的其他色谱柱。

3.根据权利要求1所述的一种酵母源饲料中谷胱甘肽含量的测定方法，其特征在于：对于试剂准备中的还原型谷胱甘肽标准品、磷酸二氢钠和辛烷磺酸钠，其纯度应均为95%以上。

4.根据权利要求1所述的一种酵母源饲料中谷胱甘肽含量的测定方法，其特征在于：对于含量测定中标准溶液的配制，主要包括以下步骤：

①准确称取10.0mg谷胱甘肽对照品，用超纯水溶解，并定容至50mL刻度，依度为200ug/mL，混匀备用；

②分别取谷胱甘肽对照品储备液0.0、2.5、5.0、7.5、12.5mL（200ug/mL)于50mL容量瓶中，加超纯水定容至刻度混匀，相当于0、10、20、30、50ug/mL，作内标准系列应用液。

5.根据权利要求1所述的一种酵母源饲料中谷胱甘肽含量的测定方法，其特征在于：对于含量测定中样液的制备，主要包括以下步骤：

①准确称取2-2.5g样品后粉碎于15mL离心管内；

②加超纯水5mL，混匀，超声波提取10min，离心，取上清液；

③重复上述操作7-8次，所有上清液汇聚至100mL容量瓶中，用超纯水定容至100mL，过0.45um滤膜作为样品分析液。

6.根据权利要求1所述的一种酵母源饲料中谷胱甘肽含量的测定方法，其特征在于：对于含量测定中的色谱条件，对于Cu色谱柱，主要包括：

①流动相：磷酸二氢钠和辛烷磺酸钠混合溶液（磷酸二氢钠3.0g，辛烷磺酸钠1.0g，加超纯水溶解并定容至500ml，用磷酸调节pH为3.0）：乙腈=96：4(v：v)；

②检测波长：210nm；

③流速：1.0mL/min；

④柱温：25℃；

⑤进样量：20ul。

7.根据权利要求1所述的一种酵母源饲料中谷胱甘肽含量的测定方法，其特征在于：对于含量测定中的绘制标准曲线，将配好的每种谷胱甘肽的标准溶液系列分别进样后，以标样浓度为横坐标，峰面积为纵坐标作标准曲线，线性相关系数应为0.9990以上。