[发明专利]一种酵母源饲料中谷胱甘肽含量的测定方法

说明书

本发明公开了一种酵母源饲料中谷胱甘肽含量的测定方法，包括仪器准备、试剂准备和含量测定三个方面。本发明利用以下原理：同一时刻进入色谐柱的各组分，由于在流动相和固定相之间溶解、吸附、渗透或离子交换等作用的不同，随流动相在色谱柱两相之间进行及复多次的分配，由于各组分在色谱柱中的移动速度不同，经过一定长度的色谱柱后，彼此分离开来，按顺序流出色谱柱。进入信号检测器，在记录仪上或数据处理装置上显示出各组分的谱峰数值，根据保留时间对照定性，根据峰面积计算样品中谷胱甘肽含量，从而可对谷胱甘肽的含量进行精确测定，以便得到所需的结果。

技术领域

本发明涉及谷胱甘肽技术领域，具体为一种酵母源饲料中谷胱甘肽含量的测定方法。

背景技术

谷胱甘肽是一种含γ-酰胺键和巯基的三肽，由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成，存在于几乎身体的每一个细胞。谷胱甘肽能帮助保持正常的免疫系统功能，并具有抗氧化作用、整合解毒作用。谷胱甘肽不仅可用于药物，更可作为功能性食品的基料，在延缓衰老、增强免疫力、抗肿瘤等功能性食品广泛应用。

为了了解植物组中抗坏血酸-谷胱甘肽的循坏代谢过程，需要对谷胱甘肽的含量进行测定。目前谷胱甘肽的测定方法多样，但主要集中在真核细胞、体液等样本中，难以测定。

发明内容

本发明解决的技术问题在于克服现有技术的缺陷，提供一种酵母源饲料中谷胱甘肽含量的测定方法。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种酵母源饲料中谷胱甘肽含量的测定方法，主要包括以下几个方面：

一、仪器准备，包括：

（1）高效液相色谱仪（配备柱温箱)；

（2）流动相真空抽脱气装置及0.45um 滤膜；

（3）色谱柱；

（4）分析天平，精度0.1mg；

（5）微量进样器；

二、试剂准备，包括：

（1）水；

（2）乙腈，色谱纯；

（3）还原型谷胱甘肽标准品；

（4）磷酸二氢钠；

（5）辛烷磺酸钠；

三、含量测定，包括以下步骤：

（1）标准溶液的配制；

（2）样液的制备；

（3）色谱条件；

（4）绘制标准曲线；

（5）样品的测定

对于含量测定中样品的测定，将制备好的样液进样，根据标准品的保留时间定性样品中的还原型谷胱甘肤的色谱峰；

（6）结果计算

根据样品的峰面积，计算谷胱甘肽组分的含量；

（7）精密度

在重复性条件下获得两次测定结果的绝对差值应不超过算术平均值的10%。

优选的，对于仪器准备中的色谱柱，选用C18柱，其填料粒径为5μm，柱尺寸为4.6mmx250mm 或分析效果相似的其他色谱柱。

优选的，对于试剂准备中的还原型谷胱甘肽标准品、磷酸二氢钠和辛烷磺酸钠，其纯度应均为95%以上。

优选的，对于含量测定中标准溶液的配制，主要包括以下步骤：

①准确称取10.0mg谷胱甘肽对照品，用超纯水溶解，并定容至50mL刻度，依度为200ug/mL，混匀备用；

②分别取谷胱甘肽对照品储备液0.0、2.5、5.0、7.5、12.5mL（200ug/mL)于50mL容量瓶中，加超纯水定容至刻度混匀，相当于0、10、20、30、50ug/mL，作内标准系列应用液。

优选的，对于含量测定中样液的制备，主要包括以下步骤：

①准确称取2-2.5g样品后粉碎于15mL离心管内；