[发明专利]一种表征木质素与纤维素酶相互作用的方法

权利要求书

1.一种表征木质素与纤维素酶相互作用的方法，其特征在于，先制备木质素溶液，然后将木质素溶液滴加在表面等离子共振技术金芯片上，旋涂制得木质素膜；将纤维素酶通入SPR仪器，实时监测木质素组分和纤维素酶之间动态吸附过程，获得木质素与纤维素酶相互作用结果。

2.根据权利要求1所述的表征木质素与纤维素酶相互作用的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)预处理物料的制备；

2)表面木质素的制备；

3)残留木质素的制备；

4)木质素和纤维素酶之间动态吸附过程检测

配置0.5％的表面木质素DMSO溶液和残留木质素DMSO溶液，随后将用平口注射器滴加100μL溶液在表面等离子共振技术金芯片上，静置1min后，用旋涂仪以5kr/min的速度旋涂制得木质素膜，在40℃下真空干燥4h，然后在去离子水中清洗确保DMSO完全去除，在40℃下真空干燥12小时；

在将纤维素酶蛋白溶液通入SPR仪器前，将0.05M柠檬酸钠缓冲液以0.1mL/min的流速通入，以获得稳定的基线；稳定后，将纤维素酶蛋白浓度为0.1、0.05、0.02、0.01和0.005g/L的溶液以0.1mL/min的流速通入4分钟，观察木质素和纤维素酶的吸附行为；随后，通入0.05M柠檬酸钠缓冲液，得到解离纤维素酶在木质素膜上的解离曲线；采用SPR Navi DataViewer软件处理SPR曲线，采用Scrubber软件分析动力学常数；

5)获得检测结果。

3.根据权利要求1所述的表征木质素与纤维素酶相互作用的方法，其特征在于，步骤1)中，预处理物料的制备为：采用1％硫酸溶液预处理竹屑，并使用蒸馏水洗残渣至中性，即获得预处理物料。

4.根据权利要求1所述的表征木质素与纤维素酶相互作用的方法，其特征在于，步骤2)中，表面木质素的制备为：分别采用不同溶剂对预处理物料进行抽提，制备不同特性的表面木质素；所述的溶剂为：体积比为96∶4的1，4-二氧六环/水溶液、95％酒精和四氢呋喃。

5.根据权利要求4所述的表征木质素与纤维素酶相互作用的方法，其特征在于，抽提过程为：取预处理物料至锥形瓶中，按照固液比为1∶10加入溶剂，以150r/min的转速在磁力搅拌上室温下抽提1天；结束后，固液分离，并在提取后的固体中再次加入新鲜的有机抽提溶液继续抽提；以上过程重复三次，保证表面木质素最大程度被提取；收集三次的上清液混合在一起，通过旋转蒸发和真空冷冻干燥去除抽提溶剂，得到木质素固体。

6.根据权利要求1所述的表征木质素与纤维素酶相互作用的方法，其特征在于，步骤3)中，残留木质素的制备为：取绝干的木质素固体至行星式球磨机，以600r/min的转速有效研磨6h。

7.根据权利要求1所述的表征木质素与纤维素酶相互作用的方法，其特征在于，步骤5)中，检测结果为：不同木质素组分与纤维素酶的吸附能力无明显差异，SL组分比MWL组分更容易发生解离作用，SL与纤维素酶的亲和力K_D值为39.4-52.6nM，MWL与纤维素酶的K_D值为6.8-24.7nM。

8.根据权利要求1所述的表征木质素与纤维素酶相互作用的方法，其特征在于，所述的木质素为假木质素。