[发明专利]一种靶向性外泌体的制备方法在审
| 申请号： | 202210896025.9 | 申请日： | 2022-08-01 |
| 公开（公告）号： | CN116200341A | 公开（公告）日： | 2023-06-02 |
| 发明（设计）人： | 尹燕锋;李立;胡宗强;颜春涛;王依婷;马丽;雷春梅 | 申请（专利权）人： | 昆明市第一人民医院 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/62;C12N15/867;A61K47/46 |
| 代理公司： | 六安立尚专利代理事务所(普通合伙) 34264 | 代理人： | 黄炜 |
| 地址： | 650000 云南*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 靶向 性外泌体 制备 方法 | ||
1.一种靶向性外泌体的制备方法，其特征在于：具体包括如下步骤：
S10：将信号肽和靶向性蛋白进行基因融合，即将信号肽序列加到靶向蛋白的C末端，得到质粒或慢性病毒，信号肽序列为32个氨基酸残基：CEGISLLAQNTSWLLLLLLSLSLLQATDFMSL；
S20：将构建好的质粒或慢性病毒转染或感染干细胞或其它细胞，再进行筛选，筛选出纯度高的转染或感染的干细胞或其它细胞；
S30：培养并收集细胞上清，分离其中的外泌体，并对其进行纯化鉴定；
S40：用上述外泌体作为载体运输小分子药物、蛋白类、核酸物质等，得到信号肽+靶向蛋白的组件；
S50：将信号肽+靶向蛋白的组件加载在脂质体、纳米颗粒或其它物质表面，使脂质体、纳米颗粒或其它物质获得靶向性，得到具有靶向性物质。
2.根据权利要求1所述的靶向性外泌体的制备方法，其特征在于：所述靶向性蛋白采用Pre-S1靶向性蛋白或CD4+细胞靶性蛋白中的一种。
3.根据权利要求2所述的靶向性外泌体的制备方法，其特征在于：所述Pre-S1靶向性蛋白为GE11多肽。
4.根据权利要求2所述的靶向性外泌体的制备方法，其特征在于：所述肝癌细胞靶性蛋白为SP94多肽。
5.根据权利要求1所述的靶向性外泌体的制备方法，其特征在于：基因融合表达具体为质粒或慢性病毒携带融合基因在干细胞或其它细胞中进行融合表达。
6.根据权利要求1所述的靶向性外泌体的制备方法，其特征在于：步骤S30中纯化鉴定采用纳米流式检测法。
7.根据权利要求1所述的靶向性外泌体的制备方法，其特征在于：步骤S50中混合加工具体步骤为：利用发酵工程生产信号肽+靶向蛋白或靶向蛋白，破碎细菌收集上清，分离纯化蛋白，在4-8℃条件下进行混合后，采用超速离心方法收集，并用PBS进行冲洗，即得到具有靶向性的脂质体、纳米颗粒或其它物质。
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