[发明专利]用于淀粉糖发酵生产L-乳酸的双菌株及发酵方法和应用

权利要求书

1.凝结芽孢杆菌，其特征在于：不耐高糖但能消耗多糖的凝结芽孢杆菌BacilluscoagulansJFJY-03，保藏编号为：CCTCC M 20221040。

2.利用权利要求1所述的双菌利用淀粉糖发酵生产L-乳酸的发酵方法，其特征在于：包括以下步骤：

1）双菌活化

双菌为：耐高糖但不利用多糖的德式乳酸杆菌 Lactobacillus delbrueckii SZ01和不耐高糖但能消耗多糖的凝结芽孢杆菌JFJY-03；

 分别将德式乳酸杆菌和凝结芽孢杆菌置于LB培养平板上，在50±5℃的条件下于恒温培养箱，培养24h活化；

2）双菌的种子液培养

将位于LB培养平板上的德式乳酸杆菌和凝结芽孢杆菌分别接种至装有100mL种子培养基的250mL三角烧瓶中，于150r/min，50℃条件下在摇床培养24h，当种子液pH值降至4.5±0.5，且在600nm下，检测种子液OD值为1.2±0.2，即可认定摇瓶种子液培养完成；

3）种子罐内德式乳酸杆菌种子液培养

将培养完成的德式乳酸杆菌摇瓶种子液按10%的接种量接种至种子罐内，于150r/min，50℃条件下培养，pH设定为6.8，使用质量比为25%±5%氢氧化钙溶液作为中和剂；

4）德式乳酸杆菌上罐发酵

将步骤3）制备的德式乳酸杆菌种子液按10%的接种量接种到发酵罐中，55℃培养，转速为150 r/min，pH设定为6.8，使用氢氧化钙溶液作为中和剂，进行发酵初培养；

发酵罐内的发酵培养基为：淀粉糖（以淀粉糖内含葡糖糖计）230g/L，硫酸铵150 g/L,磷酸二铵0.5 g/L，硫酸锌0.5g/L；

5）种子罐内凝结芽孢杆菌种子液培养

将培养完成的凝结芽孢杆菌摇瓶种子液按10%的接种量接种至种子罐内，于150r/min，50℃条件下培养，pH设定为6.8，使用质量比为25%±5%氢氧化钙溶液作为中和剂；

6）凝结芽孢杆菌上罐发酵

待步骤4）发酵液内葡萄糖的浓度降至初始葡萄糖浓度的三分之一时；将步骤5）制备的德式乳酸杆菌种子液按10%的接种量接种到步骤4）内的发酵罐中，50℃培养，转速为150 r/min，pH设定为6.8，使用氢氧化钙溶液作为中和剂，进行发酵培养。

3.根据权利要求2所述的双菌株利用淀粉糖发酵生产L-乳酸的发酵方法，其特征在于：发酵完成后，发酵液内L-乳酸光纯≥99.9%；L-乳酸产酸≥17%；发酵残糖≤0.25%。

4.根据权利要求2所述的双菌株利用淀粉糖发酵生产L-乳酸的发酵方法，其特征在于：步骤2）、步骤3）和步骤5）的种子液培养基为：葡糖糖20g/L, 硫酸铵150 g/L,磷酸二铵0.5g/L，硫酸锌0.5g/L。

5.权利要求2所述的德式乳酸杆菌和凝结芽孢杆菌利用淀粉糖发酵生产L-乳酸的应用。