[发明专利]一种薄皮甜瓜杂交种子纯度的鉴定方法

权利要求书

1.一种薄皮甜瓜杂交种子纯度的鉴定方法，其特征在于，所述鉴定方法包括用引物SSR1、引物SSR2或引物SSR3对从薄皮甜瓜中提取的DNA进行扩增；

所述引物及其核苷酸序列信息如下：

引物SSR1，上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO .1所示，下游引物核苷酸序列如SEQ IDNO .2所示；

引物SSR2，上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO .3所示，下游引物核苷酸序列如SEQ IDNO .4所示；

引物SSR3，上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO .5所示，下游引物核苷酸序列如SEQ IDNO .6所示。

2.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，所述引物SSR1用于鉴定翡翠绿宝杂交种子纯度；所述引物SSR2用于鉴定鲜脆1号杂交种子纯度；所述引物SSR3用于鉴定鲜甜脆瓜和白美1号杂交种子纯度。

3.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

(1)对单株甜瓜幼苗进行甜瓜基因组DNA的提取和质量检测；

(2)以上述步骤（1）提取的基因组DNA为模板，采用如权利要求1中所述的引物进行PCR扩增；

(3)将扩增产物利用琼脂糖凝胶电泳检测；

(4)对电泳结果进行分析，然后根据电泳结果计算种子的纯度。

4.根据权利要求3所述的鉴定方法，其特征在于，所述步骤（1）中甜瓜基因组提取和质量检测的具体方法如下：

选择籽粒饱满且大小一致的翡翠绿宝、鲜甜脆瓜、白美1号和鲜脆1号甜瓜杂交种和父母亲本种子，进行播种，待长出子叶时，将子叶研磨成浆，用CTAB法提取基因组DNA，后用Nanodrop2000超微量分光光度计检测DNA质量。

5.根据权利要求3所述的鉴定方法，其特征在于，所述步骤（2）中PCR扩增的具体方法如下：

PCR扩增采用的反应体系包括：甜瓜基因组DNA 1μL，2×Easy Taq PCR Super Mix12.5μL，正反引物各1μL，加入灭菌的超纯水至25μL；

在PCR扩增程序为94℃预变性3min；然后进行30个循环，每个循环包括94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s；延伸2min后置于4℃保存。

6.根据权利要求3所述的鉴定方法，其特征在于，所述步骤（4）中电泳分析方法和纯度计算方法如下：

当母本表现为一种特征条带，父本表现为相异于母本的另一种特征条带，真正杂交种表现为同时具有母本和父本特征条带的集合，其他表现性状为假杂种；

品种纯度＝待测甜瓜杂交种子粒群中属于真正杂交种个体数/待测甜瓜杂交种子籽粒群个体数×100％。