[发明专利]一种薄皮甜瓜杂交种子纯度的鉴定方法

说明书

本发明公开了一种薄皮甜瓜杂交种子纯度的鉴定方法，所述鉴定方法包括用引物SSR1、引物SSR2或引物SSR3对从薄皮甜瓜中提取的DNA进行扩增；引物SSR1，上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；引物SSR2，上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；引物SSR3，上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。该专利公开的鉴定方法，能够特异性的鉴定翡翠绿宝、鲜脆1号、鲜甜脆瓜和白美1号的杂交种子纯度，且准确度高、速度快，适于推广应用。

技术领域

本发明涉及种子纯度鉴定技术领域，具体涉及一种薄皮甜瓜杂交种子纯度的鉴定方法。

背景技术

甜瓜是一年生草本植物，中国甜瓜的产量在世界范围内占据很大的比例，其中薄皮甜瓜的种植面积也在不断增加，因此薄皮甜瓜种子的需求日益增大，甜瓜种子大多数为杂交种，保障种子的纯度刻不容缓。

种子纯度的鉴定通常采用大田形态学鉴定，但是周期长，难度大，用地多，可信度不高。随着分子生物学技术的快速发展，可利用AFLP、RAPD、SSR等分子标记技术进行纯度鉴定，其中SSR(Simple Sequence Repeat)分子标记具有多态性高、数量丰富、重复性好、呈共显性遗传等特点，已广泛应用到多种作物杂交种的纯度鉴定中。

目前，宁波市农业科学研究院蔬菜研究所自主选育的薄皮甜瓜杂交一代品种翡翠绿宝、鲜脆1号、鲜甜脆瓜和白美1号，具有中心糖高、长势稳健，品质优，坐果率高、抗病性好等特色，深受瓜农喜爱。探索出一种可以特异型鉴定上述四种甜瓜杂交种子纯度的鉴定方法显得尤为必要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种薄皮甜瓜杂交种子纯度的鉴定方法，以解决目前不能快速、准确的鉴定出翡翠绿宝、鲜甜脆瓜、白美1号和鲜脆1号甜瓜杂交种种子纯度的问题。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种薄皮甜瓜杂交种子纯度的鉴定方法，所述鉴定方法包括用引物SSR1、引物SSR2或引物SSR3对从薄皮甜瓜中提取的DNA进行扩增；

所述引物及其核苷酸序列信息如下：

引物SSR1，上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物核苷酸序列如SEQID NO.2所示；

引物SSR2，上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，下游引物核苷酸序列如SEQID NO.4所示；

引物SSR3，上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，下游引物核苷酸序列如SEQID NO.6所示。

进一步地，所述引物SSR1用于鉴定翡翠绿宝杂交种子纯度；所述引物SSR2用于鉴定鲜脆1号杂交种子纯度；所述引物SSR3用于鉴定鲜甜脆瓜和白美1号杂交种子纯度。

进一步地，鉴定方法具体包括以下步骤：

(1)对单株甜瓜幼苗进行甜瓜基因组DNA的提取和质量检测；

(2)以上述步骤(1)提取的基因组DNA为模板，采用如权利要求1中所述的引物进行PCR扩增；

(3)将扩增产物利用琼脂糖凝胶电泳检测；

(4)对电泳结果进行分析，然后根据电泳结果计算种子的纯度。

进一步地，所述步骤(1)中甜瓜基因组提取和质量检测的具体方法如下：

选择籽粒饱满且大小一致的翡翠绿宝、鲜甜脆瓜、白美1号和鲜脆1号甜瓜杂交种和父母亲本种子，进行播种，待长出子叶时，将子叶研磨成浆，用CTAB法提取基因组DNA，后用Nanodrop2000超微量分光光度计检测DNA质量。

进一步地，所述步骤(2)中PCR扩增的具体方法如下：