[发明专利]一种鉴别井冈蜜柚苗木品种的引物组、试剂盒及鉴别方法有效
| 申请号： | 202211010226.0 | 申请日： | 2022-02-22 |
| 公开（公告）号： | CN115927712B | 公开（公告）日： | 2023-10-13 |
| 发明（设计）人： | 王雨亭;胡钟东;万水林;杨惠栋;汤雨晴;徐超;刘心澄 | 申请（专利权）人： | 江西省农业科学院园艺研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12N15/11;C12Q1/686 |
| 代理公司： | 北京众达德权知识产权代理有限公司 11570 | 代理人： | 代春茹 |
| 地址： | 330299 江西省*** | 国省代码： | 江西;36 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 鉴别 井冈蜜柚 苗木 品种 引物 试剂盒 鉴别方法 | ||
1.一种鉴别井冈蜜柚栽培种类型的引物组，其特征在于，所述引物组包括PA2、PA3中的任意1对或两对的组合；
所述PA2包括核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的PA2-F和核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的PA2-R；
所述PA3包括核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的PA3-F和核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的PA3-R。
2.根据权利要求1所述引物组，其特征在于，所述井冈蜜柚栽培种包括金兰柚和金沙柚。
3.一种包含权利要求1或2所述引物组的鉴定井冈蜜柚栽培种类型的试剂盒。
4.根据权利要求3所述试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR反应试剂。
5.一种鉴别井冈蜜柚栽培种类型的方法，其特征在于，包括以下步骤：以井冈蜜柚栽培种的基因组DNA为模板DNA，利用权利要求1或2所述引物进行PCR扩增，当扩增产物只有一条带时是纯合，该品种为父本沙田柚或母本金兰柚；有两条或两条以上带时为杂合，该品种为子代金沙柚。
6.根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述基因组DNA提取自蜜柚树体幼嫩叶片。
7.根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述PCR扩增的体系以15μl计，包括：7μl的Mix液，0.3μl的10mmol/L的正向引物，0.3μl的10mmol/L的反向引物，1.5μl的模板DNA和余量的ddH2O。
8.根据权利要求5或7所述方法，其特征在于，所述PCR扩增的程序，包括94℃预变性5min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，反应进行35个循环；72℃再延伸5min。
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