[发明专利]B型副鸡禽杆菌抗原PilA蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种B型副鸡禽杆菌抗原PilA蛋白及其制备方法和应用。本发明中B型副鸡禽杆菌抗原PilA蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明还提供了B型副鸡禽杆菌抗原PilA蛋白在制备用于动物免疫接种B型副鸡禽杆菌亚单位疫苗中的应用，本发明制备的B型副鸡禽杆菌亚单位疫苗可有效抵抗副鸡禽杆菌血清B型菌株的感染。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，尤其涉及一种B型副鸡禽杆菌保护性抗原蛋白及其其制备方法和应用。

背景技术

副鸡禽杆菌(Avibacterium paragallinarum，Apg)是鸡传染性鼻炎(IC)的病原，为革兰阴性菌，主要引起鸡的肿头肿脸、流泪甩鼻及产蛋率下降，给养鸡业造成了重大经济损失。副鸡禽杆菌原名副鸡嗜血杆菌，2005年Blackall等将该病原体的名称由原来的副鸡嗜血杆菌改为副鸡禽杆菌。Lieck于1932年初次分离到了该病的病原体。美国学者Page根据Hpg菌株血凝抑制作用的特性，将Hpg分为A、B、C 3个血清型。目前控制鸡传染性鼻炎的方法主要是采用灭活疫苗预防和抗生素治疗的综合措施。

目前，副鸡禽杆菌已鉴定到的的毒力因子有血凝素抗原、荚膜、脂多糖、RTX样毒素等，研究热点集中在血凝素抗原。目前，副鸡禽杆菌保护性抗原的研究主要有荚膜多糖、血凝素、二价丝氨酸蛋白酶RTX、孔蛋白毒素（AvxA）、外膜囊泡等。随着对红细胞凝集素蛋白研究的不断深入，编码血清A型和C型副鸡禽杆菌血凝素蛋白的Hmtp210基因序列可变区表现出较好的免疫原性，保护效果达83%~100%。但是血清B型的HMTp210蛋白的免疫原性不及A型和C型，很难作为疫苗候选蛋白，因此，开发副鸡禽杆菌的亚单位疫苗，急需寻找一个具有高保护效果的候选蛋白。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种B型副鸡禽杆菌抗原PilA蛋白及其制备方法；本发明的另一个目的在于提供一种动物免疫接种用的B型副鸡禽杆菌亚单位疫苗，旨在能够有效提高经B型副鸡禽杆菌亚单位疫苗免疫后的鸡对副鸡禽杆菌B型攻击的抵抗力，降低鸡群的发病率。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种B型副鸡禽杆菌抗原PilA蛋白，其具有SEQ ID NO.1所示氨基酸序列。

B型副鸡禽杆菌抗原PilA蛋白的编码基因，所述编码基因的核苷酸序列为SEQ IDNO.2。

一种改造PilA蛋白，所述改造PilA蛋白是对B型副鸡禽杆菌抗原PilA蛋白中的一个或多个氨基酸进行删除、替换或添加获得的。

一种用于表达B型副鸡禽杆菌抗原PilA蛋白的重组载体，所述重组载体包含如权利要求1所述的B型副鸡禽杆菌抗原PilA蛋白的编码基因。

优选地，所述重组载体的原核表达载体包括pET32a载体、pET28a载体、pGEX-6P-1载体或pCold载体。

优选地，所述B型副鸡禽杆菌抗原PilA蛋白的编码基因的核苷酸序列为SEQ IDNO.2。

一种用于表达B型副鸡禽杆菌抗原PilA蛋白的重组载体的构建方法，包括以下步骤：

步骤1）引物设计及合成：

按照pilA基因序列设计上下游引物，上下游引物分别引入 BamHI、 HindIII酶切位点，上、下游引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成；其中，上游引物PilA-F的引物序列（5’-3’）为CGCGGATCCCAAAACCCAACCCATT，下游引物PilA-R的引物序列（5’-3’）为CCCAAGCTTTCCGCAAAATCCCGCT；上游引物PilA-F引物序列的序列表为SEQ ID NO.3，下游引物PilA-R引物序列的序列表为SEQ ID NO.4。