[发明专利]一种适用于多种棕榈酰基肽的HPLC分析方法

说明书

本发明涉及一种适用于多种棕榈酰基肽的HPLC分析方法，其特征在于：第一步：配制一个或多个待测棕榈酰基肽样品的溶液，所述棕榈酰基肽样品可以是单一种棕榈酰基肽或多种棕榈酰基肽的混合物；第二步：根据配制的待测棕榈酰基肽样品的种类，设定液相色谱条件；第三步：配制分析用流动相；第四步：采用分析程序对其中一个待测棕榈酰基肽样品进行测定；第五步：采用流动相B清洗色谱柱1~5min；第六步：重复第四步和第五步，对其他未测的待测棕榈酰基肽样品依次进行测定。本发明的适用于多种棕榈酰基肽的HPLC分析方法操作简单，连续分离测定多种棕榈酰基肽时，节约大量的时间成本和经济成本，对多种棕榈酰基肽具有普适性。

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种适用于多种棕榈酰基肽的高效液相色谱法(HPLC)分析方法。

背景技术

现有技术中，对于肽类的HPLC分析方法已有很多报道，然而，关于棕榈酰基肽的分析方法鲜有报道。棕榈酰基肽由于较正常肽类多了一个棕榈酰基修饰，导致肽本身的性质发生了较大变化，通常用的肽类分析方法已不再适用于棕榈酰基肽。现有技术文件CN106546673 A中公开了一种利用高效液相色谱法分离棕榈酰五胜肽-3的方法，然而，该方法为了改善色谱峰峰形和分离效果，在流动相里添加三氟乙酸。这样会导致最终产品中酸类或三氟乙酸有残留，使产品呈现酸性并能闻到明显的酸味，而一些肽类实际在酸性条件下并不稳定，影响其储存时间。再者，由于三氟乙酸是强酸，对色谱柱的耐受性有很高要求，一般色谱柱无法承受强酸，需采用强化型色谱柱。

此外，现有技术中也鲜有使用一种通用的HPLC方法进行多种肽的连续分离测定。一般是每种肽对应一个专一的方法，不仅使得流动相配制工作繁琐，而且所需试剂种类繁多，无论从管理上还是从所需空间上都需要很大的投入。例如：肽1用的流动相是甲醇和水，而用的分析程序是程序1，用的色谱柱是硅胶柱，分析时间为10min；而肽2用的流动相是乙腈和水，而用的分析程序是程序2，用的色谱柱为十八烷基柱，分析时间为10min。当分析完肽1后切换成分析肽2时，不仅要对硅胶柱进行清洗，然后换成十八烷基柱，更要配制乙腈和水流动相，再对十八烷基柱进行前期清洗，而后再对其进行平衡，这就需要花费大概2小时的时间。然而分析时间其实只需要10min，这前后会造成大量的时间成本浪费。如果能对其方法进行统一，由于更换方法导致的2小时的浪费时间里还可以分析12个样品。

已有相关文献报道：不同的肽类使用不同的流动相，如：乙腈或甲醇与水的配比从而达到分离的目的。同时也有使用纯有机试剂或无机盐的相关报道。但这些方法均只能满足一种肽或蛋白，并不通用于大部分肽类或蛋白质类，而且使用无机盐时如果冲洗不彻底极易造成仪器或色谱柱堵塞，给后续工作带来困扰。

在以往的工作中，肽类分析时很容易出现几种肽不能完全分离的情况，而在分析肽类含量时又要求必须完全分离，否则无法准确计算肽的含量。同时，分析多种肽类时通常每种肽对应一种方法，包括分析程序，流动相成分及配比。使得操作步骤复杂繁琐。

本发明人经过长期深入的研究，并未发现可以连续性分析多种棕榈酰基肽的HPLC分析方法的报道。

因此，亟待研究探寻一种更加通用的高效液相色谱法，对更多种类的棕榈酰基肽具有普适性。

发明内容

发明要解决的问题

针对现有技术存在的问题，本发明的目的之一是解决对多种棕榈酰基肽样品连续进行HPLC方法分离测定时，需要更换或清洗色谱柱、更换流动相、重新进行平衡等工序，造成时间成本上的浪费的问题。

本发明的再一目的是解决当流动相中含有无机盐时，冲洗不彻底极易造成仪器或色谱柱堵塞等问题。

本发明的最重要目的是解决棕榈酰基肽溶解的问题。此外，本发明另一目的是解决现有技术中为了改善色谱峰峰形添加的三氟乙酸对色谱柱的负担的问题。

用于解决问题的方案

本发明涉及：