[发明专利]一种白术内生真菌及其在白术悬浮细胞培养中的应用

说明书

本发明公开了一种白术内生真菌及其在白术悬浮细胞培养中的应用，属于植物内生菌资源利用与植物遗传转化体系技术领域。所述的内生真菌是从菊科苍术属植物白术活体中采用内生真菌分离纯化技术分离获得的，分类命名为接合菌门毛霉菌目总状毛霉AM481‑1(Mucorracemosus)，菌种保藏编号为CGMCC No.40311。本发明同时公开了所述内生真菌的用途：能促进白术悬浮细胞的生长，提升悬浮细胞鲜重，加快白术悬浮细胞体系中白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ与苍术酮含量积累。本发明的内生真菌对白术悬浮细胞生长与次生代谢具有显著的促进作用，为白术药效成分生物合成领域带来广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及植物内生真菌资源利用与植物遗传转化体系技术领域，具体地说，是一种白术内生真菌及其在促进白术悬浮细胞生长与次生代谢产物积累中的应用。

背景技术

白术为菊科苍术属多年生草本植物白术(Atractylodes macrocephala Koidz.)的干燥根茎，是常用大宗中药材，浙江省著名道地药材“浙八味”之一。白术味苦、甘，性温，归脾、胃经，具有健脾益气，燥湿利水，止汗，安胎的功效。现代药理学研究表明，白术中分离提取出的白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ、苍术酮以及多糖类等活性成分对抗肿瘤、抗炎、胃肠调节功能和降低胰岛素水平等方面具有积极作用。因此，白术在临床药理上有着广阔的开发前景与应用市场。

植物细胞悬浮培养是指将分散的单细胞或小细胞聚集体接种在液体培养基中进行振荡培养的细胞培养技术。与栽培植物相比，植物细胞悬浮培养具有生产可控、无污染、产品质量较稳定均一等优点，可以探索成为植物次生代谢活性成分的新合成路线，并作为新活性成分合成途径之一。目前国内外学者对一些药用植物进行了悬浮细胞培养的研究，如金荞麦、长鞭红景天、喜树、淫羊藿等，并且通过细胞培养获得了许多重要的药用成分，如小蘖碱、归宁、胆固醇等。

真菌诱导子是一类能诱导植物细胞产生次生代谢产物的活性物质，诱导子通过信号转导途径，引起相关基因表达发生变化，从而调节次级代谢产物合成途径中相关酶的活性，诱导特定次级代谢产物的积累。内生真菌诱导子诱导植物产生的活性物质主要有生物碱、萜类、黄酮类、皂苷类、多糖和酚类等物质。特别是药用植物中，学者们已经开始利用内生真菌接种诱导药用植物提高次生代谢产物含量或者调控次生代谢产物合成。张长平等将尖孢镰刀菌胞壁成分的粗提物接入南方红豆杉中后，其次生代谢产物紫杉醇含量为对照组的5倍余。张顺仓等将真菌诱导子接入丹参培养体系后，显著提高了其酚酸类、丹参酮类的物质含量。有学者还利用内生真菌诱导子诱导长春花培养细胞，长春碱、阿玛碱等多类生物碱产量均有提高。

但是，关于白术内生真菌诱导子促进白术悬浮细胞生长与次生代谢的应用目前还未见报道。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种白术内生真菌及其在促进白术悬浮细胞生长与次生代谢产物积累的应用。

本发明的第一方面，提供了一种药用植物内生真菌，所述的内生真菌是从菊科苍术属植物白术(Atractylodes macrocephala Koidz.)活体中采用内生真菌分离纯化技术分离获得的，经微生物分类学鉴定为接合菌门毛霉菌目总状毛霉AM481-1(Mucorracemosus)。该菌株已保藏，菌株保藏编号为CGMCC No.40311，保藏日期为2022年9月5日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编为100101。

本发明所述的内生真菌的固体培养特征为：

本发明所述的内生真菌在马铃薯葡萄糖琼脂固体培养基(PDA)上26℃培养，生长较快，菌落整体呈棕白色，丝状菌丝显见，中心菌丝稠密，外围相对稀疏，见图1。

本发明所述的内生真菌在光学显微镜下的形态特征为：菌丝粗壮无假根，孢囊梗不成束，单生直立，球形孢子囊大，顶生，内含大量孢子，孢子多为短卵形，壁薄，平滑，见图2。