[发明专利]一种从蝙蝠蛾拟青霉菌丝体中分离纯化虫草素的方法

权利要求书

1.一种从蝙蝠蛾拟青霉菌丝体中分离纯化虫草素的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)将干燥后的蝙蝠蛾拟青霉菌丝体粉碎、过筛，得到蝙蝠蛾拟青霉菌丝体粉；

(2)将蝙蝠蛾拟青霉菌丝体粉用纤维素酶和蛋白酶进行复合酶解处理，过滤，收集滤液；

(3)将滤液过大孔树脂柱，依次用水和乙醇水溶液进行洗脱，收集洗脱液；

(4)将洗脱液用高效液相色谱法进行纯化，即得。

2.根据权利要求1所述的从蝙蝠蛾拟青霉菌丝体中分离纯化虫草素的方法，其特征在于，所述纤维素酶包括β-葡萄糖苷酶、内切葡聚糖酶和外切葡聚糖酶；

优选地，所述蛋白酶包括木瓜蛋白酶和胰蛋白酶。

3.根据权利要求2所述的从蝙蝠蛾拟青霉菌丝体中分离纯化虫草素的方法，其特征在于，所述纤维素酶中滤纸酶活与β-葡萄糖苷酶活的比例为(3-5):1；

优选地，所述木瓜蛋白酶酶活与胰蛋白酶酶活的比例为1:(1-3)。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的从蝙蝠蛾拟青霉菌丝体中分离纯化虫草素的方法，其特征在于，所述纤维素酶的添加量为蝙蝠蛾拟青霉菌丝体粉的0.1-0.8％；

优选地，所述蛋白酶的添加量为蝙蝠蛾拟青霉菌丝体粉的0.5-1.5％；

优选地，所述复合酶解处理在pH＝5.0-5.5，温度为45-55℃下进行30-70min。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的从蝙蝠蛾拟青霉菌丝体中分离纯化虫草素的方法，其特征在于，所述大孔树脂柱为D101大孔树脂柱；

优选地，所述滤液以0.5-1.5BV/hr的流速上样吸附于大孔树脂柱；

优选地，所述水的洗脱体积为1-4倍柱体积。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的从蝙蝠蛾拟青霉菌丝体中分离纯化虫草素的方法，其特征在于，所述乙醇水溶液以2-6BV/hr的流速进行洗脱；

优选地，所述乙醇水溶液的洗脱时间为1.5-2.5h；

优选地，所述乙醇水溶液的浓度为50-98％，进一步优选70-90％。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的从蝙蝠蛾拟青霉菌丝体中分离纯化虫草素的方法，其特征在于，所述高效液相色谱法中使用的固定相为C18柱；

优选地，所述高效液相色谱法中使用的流动相为甲醇水溶液；

优选地，所述甲醇水溶液的浓度为10-40％。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的从蝙蝠蛾拟青霉菌丝体中分离纯化虫草素的方法，其特征在于，所述高效液相色谱法中检测波长为258-262nm；

优选地，所述高效液相色谱法中流动相流速为0.8-1.2mL/min；

优选地，所述高效液相色谱法中检测温度为28-32℃。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的从蝙蝠蛾拟青霉菌丝体中分离纯化虫草素的方法，其特征在于，所述蝙蝠蛾拟青霉菌丝体粉的制备方法包括：

将蝙蝠蛾拟青霉菌株接种于液体发酵培养基中进行发酵，之后过滤发酵液，收集烘干菌丝体，然后粉碎，过筛，即得。

10.根据权利要求9所述的从蝙蝠蛾拟青霉菌丝体中分离纯化虫草素的方法，其特征在于，所述液体发酵培养基的组成包括：蔗糖、豆饼粉、硫酸氢二钾和硫酸镁，pH为6.0-7.0；

优选地，所述发酵条件为：转速100-250rpm，温度为22-28℃，时间为100-140h；

优选地，所述烘干在温度75-85℃下进行；

优选地，所述过筛的目数为60-100目。