[发明专利]一种从蝙蝠蛾拟青霉菌丝体中分离纯化虫草素的方法

说明书

本发明涉及一种从蝙蝠蛾拟青霉菌丝体中分离纯化虫草素的方法，包括：(1)将干燥后的蝙蝠蛾拟青霉菌丝体粉碎、过筛，得到蝙蝠蛾拟青霉菌丝体粉；(2)将蝙蝠蛾拟青霉菌丝体粉用纤维素酶和蛋白酶进行复合酶解处理，过滤，收集滤液；(3)将滤液过大孔树脂柱，依次用水和乙醇水溶液进行洗脱，收集洗脱液；(4)将洗脱液用高效液相色谱法进行纯化，即得。本发明所涉及的分离纯化虫草素的方法全程不涉及热提取和有毒溶剂的使用，全过程也无强酸强碱类物质参与，并且具有提取时间短，反应条件温和，产物不易变性，产品纯度高等优点，是一个低碳绿色的化工制备分离过程。

技术领域

本发明属于虫草素分离技术领域，涉及一种从蝙蝠蛾拟青霉菌丝体中分离纯化虫草素的方法。

背景技术

蝙蝠蛾拟青霉是从冬虫夏草分离得到的一种虫草真菌，在冬虫夏草中广泛存在，该菌株可通过发酵培养后，获得干燥的菌丝体产物，其药理作用和化学成分与冬虫夏草相似，具有保护肾脏功能、增强机体免疫力、抗肿瘤等药理作用。由于野生冬虫夏草非常珍贵，且资源稀缺，现蝙蝠蛾拟青霉菌丝体已日渐成为冬虫夏草的替代品。富含多糖、核苷类、多种氨基酸、重要微量元素和总黄酮等营养物质，蝙蝠蛾拟青霉菌丝体被国家食品药品监督局批准的可用于保健食品的真菌菌种。

虫草素又称冬虫夏草素、虫草菌素，别名3’-脱氧腺苷，化学式为C₁₀H₁₃N₅O₃，是蝙蝠蛾拟青霉的主要活性成分，是第一个从真菌中分离出来的核苷类抗生素,研究结果表明，虫草素具有肺肾的保护性、抗三高、抗肿瘤、神经保护性、抗炎、抗氧化和免疫调节等生物活性。因此，虫草素在抗衰老、保健、新药研制等领域备受学者关注，有良好的临床应用前景。

目前虫草素价格昂贵，可达每克数万元，开发更加高效的虫草素制备方法意义重大。野生冬虫夏草的虫草素含量比较低，而通过蝙蝠蛾拟青霉菌株发酵培养可以极大提高虫草素的含量，进一步结合高效的分离纯化方法，获得高纯度的虫草素产品，从而对我国虫草市场形成有力的补充。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种从蝙蝠蛾拟青霉菌丝体中分离纯化虫草素的方法。

为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种从蝙蝠蛾拟青霉菌丝体中分离纯化虫草素的方法，所述方法包括：

(1)将干燥后的蝙蝠蛾拟青霉菌丝体粉碎、过筛，得到蝙蝠蛾拟青霉菌丝体粉；

(2)将蝙蝠蛾拟青霉菌丝体粉用纤维素酶和蛋白酶进行复合酶解处理，过滤，收集滤液；

(3)将滤液过大孔树脂柱，依次用水和乙醇水溶液进行洗脱，收集洗脱液；

(4)将洗脱液用高效液相色谱法进行纯化，即得。

本发明所涉及的分离纯化虫草素的方法依次经过前处理、复合酶解处理、过大孔树脂柱纯化处理和高效液相分离纯化，全程不涉及热提取和有毒溶剂的使用，全过程也无强酸强碱类物质参与，并且具有提取时间短，反应条件温和，产物不易变性，产品纯度高等优点，是一个低碳绿色的化工制备分离过程。因此，本发明具有环保和节能的双重意义，为虫草素的有效利用创造了条件。

优选地，所述纤维素酶包括β-葡萄糖苷酶、内切葡聚糖酶和外切葡聚糖酶。

优选地，所述蛋白酶包括木瓜蛋白酶和胰蛋白酶。

本发明所涉及的分离纯化方法中使用的复合酶优选使用上述特定类型的纤维素酶和蛋白酶，使最终产品的纯度更高。

优选地，所述纤维素酶中滤纸酶活与β-葡萄糖苷酶活的比例为(3-5):1，例如3:1、3.5:1、4:1、4.5:1、5:1等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。