[发明专利]鉴定气单胞菌的特异性新分子靶标及其快速检测方法

权利要求书

1.一组用于检测气单胞菌属及嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌、豚鼠气单胞菌的分子靶标，其特征在于，所述的气单胞菌属（Aeromonas）的分子靶标核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）的分子靶标核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，维氏气单胞菌（Aeromonas veronii）的分子靶标核苷酸序列如SEQ.ID No.3所示，豚鼠气单胞菌（Aeromonas caviae）的分子靶标核苷酸序列如SEQ.ID No.4所示。

2.一组用于检测气单胞菌属及嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌、豚鼠气单胞菌的引物组，其特征在于，所述的引物组包括：检测气单胞菌的引物包括SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的引物；检测嗜水气单胞菌的引物包括SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示的引物；检测维氏气单胞菌的引物包括SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示的引物；检测豚鼠气单胞菌的引物包括SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示的引物。

3.一种非疾病的诊断和治疗目的的检测气单胞菌属及嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌、豚鼠气单胞菌的方法，其特征在于，提取样品的DNA，然后用权利要求2所述的用于检测气单胞菌属及嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌、豚鼠气单胞菌的引物组分别进行PCR扩增，如获得条带大小为127bp，则含有气单胞菌；如获得条带大小为386bp，则含有嗜水气单胞菌；如获得条带大小为333bp，则含有维氏气单胞菌；如获得条带大小为259bp，则含有豚鼠气单胞菌。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的PCR，其反应体系为2×PrimeSTARMax Premix 12.5μL，正向引物10μmol/L 1μL，反向引物10μmol/L 1μL，模板DNA 2.5ng/μL1μL，ddH₂O 9.5μL。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述PCR，其反应程序为98℃预变性3min；98℃变性10s、60℃退火5s、72℃延伸5s，共进行35个循环；72℃延伸10min。

6.一种非疾病的诊断和治疗目的的对气单胞菌属及嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌、豚鼠气单胞菌进行定量的qPCR检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）应用权利要求2所述的用于检测气单胞菌属及嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌、豚鼠气单胞菌的引物组分别绘制气单胞菌属及嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌、豚鼠气单胞菌的标准曲线；

（2）应用权利要求2所述的用于检测气单胞菌属及嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌、豚鼠气单胞菌的引物组对样本进行qPCR扩增，获得样本的ct值，根据标准曲线计算该样本中含气单胞菌属、嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌或豚鼠气单胞菌的含量。

7.根据权利要求6所述的qPCR检测方法，其特征在于，所述的qPCR，其扩增体系为：2×SYBR Green Premix 反应液5 μL，待测模板DNA 1uL，10 μmol/L引物各0.5 μL，灭菌双蒸水3μL。

8.根据权利要求6所述的qPCR检测方法，其特征在于，所述的qPCR，其反应程序两步法PCR反应程序：95℃预热30s；两步法扩增95℃ 5s、60℃退火30s，共进行40个循环。

9.一种检测气单胞菌属及嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌、豚鼠气单胞菌的试剂盒，其特征在于，包括权利要求2所述的用于检测气单胞菌属及嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌、豚鼠气单胞菌的引物组。

10.权利要求1所述的用于检测气单胞菌属及嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌、豚鼠气单胞菌的分子靶标、权利要求2所述的用于检测气单胞菌属及嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌、豚鼠气单胞菌的引物组在检测气单胞菌属及嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌、豚鼠气单胞菌中的应用，该应用是非疾病的诊断和治疗目的的。