[发明专利]一种氰水合酶菌株构建方法及应用于烟酰胺生产在审
| 申请号： | 202211214516.7 | 申请日： | 2022-09-30 |
| 公开（公告）号： | CN115851562A | 公开（公告）日： | 2023-03-28 |
| 发明（设计）人： | 汪本助;徐斌;方国康;卓雪瑞;纪传侠;王舒 | 申请（专利权）人： | 安徽丰原发酵技术工程研究有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12P17/12;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京睿阳联合知识产权代理有限公司 11758 | 代理人： | 周莉 |
| 地址： | 233000 安徽省蚌埠市中国（安*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 水合 菌株 构建 方法 应用于 烟酰胺 生产 | ||
1.一种基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌中导入了腈水合酶基因和L-精氨酸生物合成途径的酶的基因；并且所述基因工程菌中敲除了分解L-精氨酸的酶的基因。
2.根据权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述腈水合酶基因来自于玫瑰色红球菌Rhodococcus rhodochrous，且按照大肠杆菌的密码子进行序列优化；
优选地，所述腈水合酶基因如SEQ ID NO.13所示。
3.根据权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述L-精氨酸生物合成途径酶选自argA、argB、argC、argD、argF、argG、argH和argJ中的至少一种；
所述L-精氨酸生物合成途径酶选自argB和/或argJ。
4.根据权利要求1-3任一项所述的基因工程菌，其特征在于，所述分解L-精氨酸的酶选自speA、adiA、astA、argE和argR中的至少一种；
优选地，所述分解L-精氨酸的酶选自speA、adiA、astA和argR中的至少一种。
5.根据权利要求1-4任一项所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌的出发菌株为大肠杆菌，优选为大肠杆菌JM109(DE3)。
6.权利要求1-5任一项所述基因工程菌的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括以下步骤：
敲除出发菌株中分解L-精氨酸的酶的基因；
将L-精氨酸生物合成途径的酶的基因导入所述出发菌株；
将腈水合酶基因导入所述出发菌株，从而获得所述基因工程菌。
7.利用权利要求1-5任一项所述的基因工程菌生产腈水合酶的方法，其特征在于，所述基因工程菌生产腈水合酶温度≥33℃，优选为大于等于37℃，小于等于42℃，更优选为大于等于37℃，小于等于40℃。
8.权利要求1-5任一项所述的基因工程菌在制备烟酰胺中的应用；
优选地，所述应用为所述基因工程菌催化烟腈制备烟酰胺。
9.权利要求1-5任一项所述的基因工程菌在降解腈类化合物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述腈类物质选自丙烯腈、己二腈、丁烯腈和烟腈中的至少一种。
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