[发明专利]一种利用HPLC测定丙硫异烟胺中杂质含量的方法

说明书

本发明公开了一种利用HPLC测定丙硫异烟胺中杂质含量的方法，属于药物分析技术领域。丙硫异烟胺中杂质包括4‑氰基吡啶、2‑丙基‑4‑氰基吡啶、异硫酰胺、2‑丙基异烟酰胺和乙硫异烟胺；包括以下步骤：1)配置供试品溶液和对照溶液；2)设置高效液相检测条件：色谱柱以十八烷基键合硅胶为填充剂，规格为250mm×4.6mm，填料粒径为5μm，柱温为35℃，以缓冲盐为流动相A，以乙腈为流动相B；流速为1.0mL/min进行梯度洗脱；3)分别精密吸取供试品溶液和对照溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图。本发明能够快速、有效、准确和可靠的分离检测出丙硫异烟胺中有关物质，有利于提高丙硫异烟胺的产品质量。

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种利用HPLC测定丙硫异烟胺中杂质含量的方法。

背景技术

丙硫异烟胺为抗结核病药，仅对分枝杆菌有效，与其他抗结核药联合用于结核病一线药物治疗无效者。

丙硫异烟胺为异烟酸的衍生物，可能对肽类合成具有抑制作用。本品对结核分枝杆菌的作用取决于感染部位的药物浓度，低浓度时仅具有抑菌作用，高浓度具有杀菌作用。抑制结核杆菌分枝菌酸的合成。本品与乙硫异烟胺有部分交叉耐药现象。

根据丙硫异烟胺工艺路线，丙硫异烟胺在生产生产过程中会产生杂质A(4-氰基吡啶)、B(2-丙基-4-氰基吡啶)、C(异硫酰胺)、D(2-丙基异烟酰胺)、E(乙硫异烟胺)，针对杂质A、B、C、D、E分离测定的相关文献报道极少，因此，提供一种测定丙硫异烟胺中杂质含量的方法对于原料制剂的生成和贮存具有重要意义。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明所要解决的技术问题是提供一种利用HPLC测定丙硫异烟胺中杂质含量的方法。

为了解决上述问题，本发明采用的技术方案为：

一种利用HPLC测定丙硫异烟胺中杂质含量的方法，包括以下步骤：

1)配置供试品溶液和对照溶液；供试品溶液的制备是方法为：取丙硫异烟胺，用乙腈溶解稀释成每1mL中含丙硫异烟胺1mg的溶液作为供试品溶液；对照溶液的制备方法为：取丙硫异烟胺对照品10mg、杂质A对照品、杂质B对照品、杂质C对照品和杂质D对照品各15mg、杂质E对照品25mg，置不同10mL量瓶中用乙腈超声溶解并稀释至刻度，作为各化合物对照品储备液I；精密量取丙硫异烟胺对照品、杂质A对照品、杂质B对照品、杂质C对照品和杂质D对照品储备液I各2.5mL，杂质E对照品储备液I5mL置同一50mL量瓶，加稀释剂稀释至刻度，作为对照品储备液II；精密量取对照品储备液II 1mL置50mL量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，作为对照品溶液；

2)设置高效液相检测条件：色谱柱以十八烷基键合硅胶为填充剂，规格为250mm×4.6mm，填料粒径为5μm，柱温为35℃，以缓冲盐为流动相A，以乙腈为流动相B；流速为1.0mL/min进行梯度洗脱；

3)分别精密吸取供试品溶液和对照溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图；

丙硫异烟胺中杂质包括杂质A、杂质B、杂质C、杂质D和杂质E；杂质A为4-氰基吡啶、杂质B为2-丙基-4-氰基吡啶、杂质C为异硫酰胺、杂质D为2-丙基异烟酰胺，杂质E为乙硫异烟胺。

进一步的，步骤2)中，缓冲盐为2g/l磷酸二氢钠，用磷酸调节PH至3.0。

进一步的，步骤2)中，梯度洗脱的条件为：0-8min，流动相A的体积百分比为95％，流动相B的体积百分比为5％；8-40min，流动相A的体积百分比从95％过渡到60％，流动相B的体积百分比从5％过渡40％；40-50min，流动相A的体积百分比为60％，流动相B的体积百分比为40％；50-50.1min，流动相A的体积百分比从60％过渡到95％，流动相B的体积百分比从40％过渡到5％；50.1-55min，流动相A的体积百分比为95％，流动相B的体积百分比为5％。