[发明专利]重组犬PD-1和犬SIRPα双融合蛋白的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包含犬PD-1蛋白胞外区突变体(PD-1mu)和犬SIRPα蛋白。

2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其中，所述犬PD-1蛋白胞外区突变体为犬PD-1蛋白胞外区T132L；

优选地，所述犬PD-1蛋白胞外区突变体具有

(a)如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；或

(b)与SEQ ID NO：1具有至少90％、优选至少95％、更优选至少98％、进一步优选至少99％同一性的且具有相同功能的氨基酸序列。

3.根据权利要求1所述的融合蛋白，其中，所述犬SIRPα蛋白为犬SIRPα蛋白胞外区全长、截短体或其突变体；

优选地，所述截短体为犬SIRPαD1区截短体；

优选地，所述犬SIRPα蛋白具有

(a)如SEQ ID NO：2-4中任意一个所示的氨基酸序列；或

(b)与SEQ ID NO：2-4中任意一个具有至少90％、优选至少95％、更优选至少98％、进一步优选至少99％同一性的且具有相同功能的氨基酸序列。

4.根据权利要求1-3中任意一项所述的融合蛋白，其中，所述融合蛋白还包括Fc片段；

优选地，所述Fc片段为IgG型，更优选为IgG1亚型；

优选地，所述Fc片段包含免疫球蛋白铰链区、CH2和CH3区；

优选地，所述Fc片段具有

(a)如SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列；或

(b)与SEQ ID NO：5具有至少90％、优选至少95％、更优选至少98％、进一步优选至少99％同一性的且具有相同功能的氨基酸序列。

5.根据权利要求4所述的融合蛋白，其中，从氨基端至羧基端，犬PD-1mu、犬SIRPα蛋白和Fc片段的顺序依次为

1)犬PD-1mu、犬SIRPα蛋白和Fc片段；或

2)犬SIRPα蛋白、犬PD-1mu和Fc片段；或

3)犬PD-1mu、Fc片段和犬SIRPα蛋白；或

4)犬SIRPα蛋白、Fc片段和犬PD-1mu；

优选地，从氨基端至羧基端，犬PD-1mu、犬SIRPα蛋白和Fc片段的顺序依次为犬PD-1mu、犬SIRPα蛋白和Fc片段；

优选地，犬PD-1mu、犬SIRPα蛋白和Fc片段之间分别直接连接或间接地通过连接子连接；

优选地，所述连接子是由2-20个柔性氨基酸组成的柔性多肽，所述柔性氨基酸选自Gly、Ser、Ala和Thr中的至少一种；更优选地，所述连接子为(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)n，其中n为2-5之间的整数。

6.根据权利要求1-5中任意一项所述的融合蛋白，其中，所述融合蛋白包含如SEQ IDNO：6-17中任意一个所示的氨基酸序列。

7.编码权利要求1-6中任意一项所述的融合蛋白的核酸；

优选地，所述核酸包含SEQ ID：23-34中任意一个所示的核苷酸序列，或其等功能的变体。

8.一种含有权利要求1-6中任意一项所述融合蛋白的编码基因的生物材料，其特征在于，所述生物材料为表达盒、转座子、载体或宿主细胞。

9.一种用于生产权利要求1-6中任意一项所述的融合蛋白的制备方法，其特征在于，该方法包括在适合于所述融合蛋白表达的条件下培养权利要求8中所述的宿主细胞，然后从培养基中回收表达的融合蛋白。

10.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含权利要求1-6中任意一项所述的融合蛋白，以及药学上可接受的载体和任选的其他治疗剂；

优选地，所述其他治疗剂选自帕拉定、环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松龙中的至少一种。