[发明专利]基于网络药理学和分子对接的四君子汤成分筛选方法及其应用

说明书

一种基于网络药理学和分子对接的四君子汤成分筛选方法，通过网络药理学和分子对接技术对非多糖组份(NPS)潜在活性成分进行筛选，再通过超高效液相色谱飞行时间质谱(UPLC‑QTOF‑MS/MS)对潜在活性成分进行定量分析，实现配方组成的确定。本发明通过网络药理学和分子对接等技术对四君子汤的活性成分群进行筛选，从而进一步强化其修复肠上皮细胞损伤，治疗脾虚证的效果。

技术领域

本发明属于中药研究开发领域，具体涉及的是一种基于网络药理学和分子对接的四君子汤成分筛选方法及其应用。

背景技术

脾虚证是以胃肠功能紊乱为主的中医证候，多因饥饱失常、劳倦过度、思虑过度、或情志失调，而损伤脾胃所致。其临床主要表现为腹泻、食欲不振、神疲乏力等症状，导致胃肠消化吸收障碍、肠道炎症病变、免疫功能低下等损伤。流行病学研究显示，脾虚证在常见疾病中的发生率约为33.9％，尤其是肠易激综合征、炎症性肠病等胃肠疾病。目前脾虚证的治疗以中药复方或中成药为主，虽疗效确切，但其化学成分复杂，作用机制不清，这对于脾虚证的临床防治及其药物开发都存在一定困难。因此如何开发“质量可控、疗效可靠、独具知识产权”的用于防治脾虚证的组分中药，成为了本领域目前迫切需要解决的问题。

四君子汤出自宋代《太平惠民和剂局方》，由人参、白术、茯苓、炙甘草以3:3:3:2的质量比组成，是脾虚证的经典方剂之一，在临床广泛使用。

发明内容

本发明提出一种基于网络药理学和分子对接的四君子汤成分筛选方法，通过网络药理学和分子对接等技术对四君子汤的活性成分群进行筛选，从而进一步强化其修复肠上皮细胞损伤和治疗脾虚证的效果。

本发明是通过以下技术方案实现的:

本发明涉及一种基于网络药理学和分子对接的四君子汤成分筛选方法，通过网络药理学和分子对接技术对非多糖组份(NPS)潜在活性成分进行筛选，再通过超高效液相色谱飞行时间质谱(UPLC-QTOF-MS/MS)对潜在活性成分进行定量分析，实现配方组成的确定和应用。

所述的潜在活性成分进行筛选是指:运用网络药理学通过在线数据库检索NPS成分与脾虚证共同作用的靶点，经蛋白相互作用(PPI)获得四君子汤NPS治疗脾虚证的核心靶点，通过KEGG信号通路富集，运用Cytoscape 3.7.1软件构建“成分-核心靶点-信号通路-疾病”互作网络，结合分子对接技术筛选四君子汤干预脾虚证的潜在活性成分；

优选地，潜在活性成分经液相色谱质谱法准确定量，按照其在NPS中的质量份比组成活性成分配方(ACC)。

所述的四君子汤的活性成分配方(ACC)，其组分及重量比例为:人参皂苷CK 1.0～1.1份、人参皂苷Rh22.1～2.2份、甘草醇3.0～3.2份、查尔酮A3.7～4.0份、白术内酯III7.2～8.1份、人参皂苷Rk37.5～8.7份、甘草次酸10.3～11.3份、甘草素110.4～118.6份、异甘草苷169.4～184.4份、人参皂苷Rg1382.0～404.5份以及人参皂苷Rb11008.3～1274.8份。

本发明涉及上述应用，将其用于制备修复划痕所致的肠上皮细胞损伤、治疗脾虚证的药物。

所述的修复是指:高糖型DMEM培养IEC-6细胞至90％融合期，由10μL移液器吸头对细胞单层进行划伤，以形成均匀的无细胞创面；并用预冷PBS轻轻清洗两次以除去细胞碎片，构建肠上皮细胞创伤，药物可通过促进肠上皮细胞增殖、迁移，修复肠上皮细胞损伤。

所述的治疗脾虚证是指:改善利血平诱导的脾虚证功小鼠能障碍、改善脾虚证小鼠免疫器官萎缩、胃肠激素分泌紊乱。

附图说明

图1为活性组合配方中候选化合物的UPLC-QTOF-MS/MS正、负离子模式的总离子流示意图；

图2为基于网络药理学对ACC中候选化合物的筛选整合信号通路示意图；