[发明专利]一种D-甘露糖的合成方法

权利要求书

1.氧化酶或所述氧化酶的突变体在以甘露醇为底物酶法合成D-甘露糖中的应用，其特征在于，所述氧化酶的来源包括：花青蓝链霉菌(Streptomyces anthocyanicus)、天蓝链霉菌(Streptomyces coelicolor)、变青链霉菌(Streptomyces lividans)、肿痂链霉菌(Streptomyces turgidiscabies)、番薯链霉菌(Streptomyces ipomoeae)、类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)、灿烂类芽孢杆菌(Paenibacillus lautus)、坚强芽孢杆菌(Cytobacillus firmus)或共生稀有放线菌(Dermacoccus sp.)。

2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，来源于花青蓝链霉菌的氧化酶的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；

来源于天蓝链霉菌的氧化酶的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示；

来源于变青链霉菌的氧化酶的氨基酸序列如SEQ ID No.6所示；

来源于肿痂链霉菌的氧化酶的氨基酸序列如SEQ ID No.8所示；

来源于番薯链霉菌的氧化酶的氨基酸序列如SEQ ID No.10所示；

来源于类芽孢杆菌的氧化酶的氨基酸序如SEQ ID No.12所示；

来源于灿烂类芽孢杆菌的氧化酶的氨基酸序列如SEQ ID No.14所示；

来源于坚强芽孢杆菌的氧化酶的氨基酸序列如SEQ ID No.16所示；

来源于共生稀有放线菌的氧化酶的氨基酸序列如SEQ ID No.18所示。

3.根据权利要求1或2所述应用，其特征在于，所述氧化酶还包括在N端和/或C端连接标签。

4.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述突变体包括：对SEQ IDNo.2所示的氨基酸序列进行如下点突变：A425V；

对SEQ ID No.4所示的氨基酸序列进行如下点突变：E295D；

对SEQ ID No.6所示的氨基酸序列进行如下点突变：N398D。

5.一种酶法合成D-甘露糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：以甘露醇为底物，利用氧化酶或所述氧化酶的突变体进行催化反应，反应产物为D-甘露糖；

所述氧化酶的来源包括：花青蓝链霉菌(Streptomyces anthocyanicus)、天蓝链霉菌(Streptomyces coelicolor)、变青链霉菌(Streptomyces lividans)、肿痂链霉菌(Streptomyces turgidiscabies)、番薯链霉菌(Streptomyces ipomoeae)、类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)、灿烂类芽孢杆菌(Paenibacillus lautus)、坚强芽孢杆菌(Cytobacillus firmus)或共生稀有放线菌(Dermacoccus sp.)。

6.根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述氧化酶或所述氧化酶的突变体以粗酶液、粗酶液冻干粉、纯酶或全细胞的形式加入。

7.根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述甘露醇浓度为0.1mmol/L～600mmol/L，所述催化反应的转速为220～300rpm/min，所述催化反应的温度为25～55℃，所述催化反应的时间为12～48h。

8.根据权利要求5或6所述方法，其特征在于，当所述氧化酶是以粗酶液、粗酶液冻干粉或纯酶的形式加入时，所述氧化酶在反应体系中的浓度为0.5g/L～10g/L；

当所述氧化酶以全细胞的形式加入时，所述全细胞的湿重为40g/L～80g/L。

9.根据权利要求8所述方法，其特征在于，所述催化反应在浓度为50～100mM，pH值为6.5～8.5的磷酸盐缓冲液中进行。

10.根据权利要求5或6所述的合成方法，其特征在于，当所述氧化酶是以粗酶液、粗酶液冻干粉或纯酶的形式加入时，所述催化反应的反应体系中除了含有甘露醇、所述氧化酶外，还含有过氧化氢酶。