[发明专利]用于检测EGFR基因的引物探针组合及试剂盒和方法

权利要求书

1.用于检测EGFR基因的引物探针组合，其特征在于，包括用于检测T790M的突变型引物和突变型探针，以及野生型探针；

所述突变型引物的序列包括如SEQ ID NO.1所示序列和SEQ ID NO.2所示序列；

所述突变型探针的序列包括如SEQ ID NO.3所示序列；

所述野生型探针的序列包括如SEQ ID NO.4所示序列。

2.如权利要求1所述的引物探针组合，其特征在于，所述引物探针组合还包括封阻探针；优选地，所述封阻探针的序列包括如SEQ ID NO.5所示序列。

3.如权利要求1所述的引物探针组合，其特征在于，所述突变型探针和所述野生型探针的两端均分别标记荧光基团和淬灭基团，且所述突变型探针和所述野生型探针上标记的荧光基团不相同。

4.如权利要求3所述的引物探针组合，其特征在于，所述荧光基团选自FAM、HEX、ROX和CY5中的一种；优选地，所述突变型探针上标记的荧光基团选自FAM；优选地，所述野生型探针上标记的荧光基团选自HEX；

和/或，所述淬灭基团选自MGB、BHQ1和BHQ2中的一种。

5.如权利要求1—4任一项所述的引物探针组合在制备检测产品中的用途；优选地，所述检测产品为EGFR-TKI耐药性检测产品。

6.一种检测EGFR基因的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含如权利要求1—4任一项所述的引物探针组合。

7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性质控品、阴性质控品、PCR反应预混液和表面活性剂中的一种或多种；优选地，所述PCR反应预混液包含PCR缓冲液、dPCR酶、dNTPs和水中的一种或多种；

和/或，所述突变型引物的两条引物在反应体系的浓度为200～500nM；

和/或，所述野生型探针在反应体系的浓度为200～500nM；

和/或，所述突变型探针在反应体系的浓度为200～500nM；

和/或，所述封阻探针在反应体系的浓度为200～500nM。

8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述dPCR酶包括Taq酶和UDG酶中的一种或两种；

和/或，所述PCR缓冲液包括Tris-HCl、氯化钾、硫酸铵和氯化镁；

和/或，所述表面活性剂选自吐温-20；优选地，所述表面活性剂在反应体系中的浓度不低于0.01wt％。

9.一种检测EGFR基因突变的方法，包括以下步骤：

1)提供基因组DNA；

2)采用如权利要求1—4任一项所述的引物探针组合对所述基因组DNA进行PCR扩增，得到PCR产物；

3)对所述PCR产物进行分析，通过荧光信号位置和强度检测T790M突变型和野生型，并对其进行定量。

10.如权利要求1—4任一项所述的引物探针组合或如权利要求6-8任一项所述的试剂盒或如权利要求9所述的方法在制备检测EGFR基因突变或耐药性的产品或筛选肿瘤药物中的用途。