[发明专利]一种靶向条纹斑竹鲨IgNAR-CH1多克隆抗体、其制备方法及其应用

说明书

本发明属于生物技术领域，涉及一种靶向条纹斑竹鲨IgNAR‑CH1多克隆抗体、其制备方法及其应用。本发明的多克隆抗体是用氨基酸序列如SEQ ID No：1所示的合成多肽与KLH耦联得到的免疫原免疫动物后得到。本发明的方法，包括如下步骤：序列选取，制备多肽，将多肽与KLH偶联制备免疫原，注射至免疫动物体内，得到IgNAR‑CH1多克隆抗体血清；对IgNAR‑CH1多克隆抗体血清进行亲和纯化，得到多克隆抗体。本发明的应用包括条纹斑竹鲨IgNAR‑CH1多克隆抗体在检测条纹斑竹鲨血清效价中的应用，以及在检测鉴定抗体类型、噬菌体文库建库筛选的研究及质量检测方面的应用。本发明中，由于采用特定的免疫原加上独特的免疫策略，对实验兔的免疫周期更短，21‑24天即可获得纯化抗体，同时获得较好的免疫效果。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种靶向条纹斑竹鲨IgNAR-CH1多克隆抗体、其制备方法及其应用，所述的应用包括条纹斑竹鲨IgNAR-CH1多克隆抗体在检测条纹斑竹鲨血清效价中的应用，以及在检测鉴定抗体类型、噬菌体文库建库筛选的研究及质量检测方面的应用。

背景技术

IgNAR是鲨鱼等软骨鱼类所独有的一种抗体，与骆驼等驼类所拥有的VHH抗体都属于纳米抗体的一种。VHH抗体免疫成熟的过程已经得到了广泛的研究，市场上商业化的VHH检测抗体比比皆是，无论是美洲驼还是骆驼，但凡是能够产生VHH抗体的骆驼科动物在免疫时都能在市场上找到适用的血清检测抗体。

而IgNAR抗体在软骨鱼类生物体内的免疫成熟过程尚不为人们所知，且IgNAR的结构也尚未被研究透彻，所以市面上仅有一两款针对护士鲨等的IgNAR检测抗体，而且这些抗体所针对的鱼类并不是条纹斑竹鲨。

相关文献表明(Roux KH,Greenberg AS,Greene L,Strelets L,Avila D,McKinney EC,Flajnik MF.Structural analysis of the nurse shark(new)antigenreceptor(NAR):molecular convergence of NAR and unusual mammalianimmunoglobulins.Proc Natl Acad Sci U S A.1998Sep 29；95(20):11804-9.doi:10.1073/pnas.95.20.11804.)，在护士鲨中，IgNAR具有5个恒定结构域(CH1-CH5)，而在条纹斑竹鲨中，CH1结构域直接连接到CH4，出现CH2以及CH3结构的缺失。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种靶向条纹斑竹鲨IgNAR-CH1多克隆抗体、其制备方法及其应用，所述的应用包括条纹斑竹鲨IgNAR-CH1多克隆抗体在检测条纹斑竹鲨血清效价中的应用，以及在检测鉴定抗体类型、噬菌体文库建库筛选的研究及质量检测方面的应用。

在不确定这些检测抗体是否能够用于条纹斑竹鲨的血清效价检测的情况下，发明人通过分析条纹斑竹鲨体内IgNAR抗体的CH1区序列，找到了其中的保守序列，合成短肽后与KLH偶联并免疫新西兰大白兔产生针对该短肽的兔源多克隆抗体。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

在本发明的第一方面，提供了一种条纹斑竹鲨IgNAR-CH1多克隆抗体。所述的多克隆抗体是用氨基酸序列如SEQ ID No：1所示的合成多肽与KLH耦联得到的免疫原免疫动物后得到。

在本发明的第二方面，提供了一种如第一方面所述条纹斑竹鲨IgNAR-CH1多克隆抗体的制备方法，包括以下步骤，

S1.制备合成多肽；所述多肽序列来源于条纹斑竹鲨IgNAR-CH1，为保守片段序列，其氨基酸序列如SEQ ID No：1所示，多肽氨基酸序列为YSCQVSHSAT；

S2.将步骤S1中制备的多肽与KLH耦联，多肽与KLH的重量比为1：1，制备免疫原，按比例混合后注射入免疫动物的体内，得到Ig NAR多克隆抗体血清；