[发明专利]鉴定鼻黏膜基底层上皮干细胞的方法

权利要求书

1.一种鉴定鼻黏膜基底层上皮干细胞的方法，其特征在于：检测待鉴定的干细胞中SOX2蛋白和SOX9蛋白的表达情况，若SOX2蛋白和SOX9蛋白同时表达，则表明该干细胞为鼻黏膜基底层上皮干细胞；若仅SOX2蛋白有表达，或仅SOX9蛋白有表达，则表明该干细胞不为鼻黏膜基底层上皮干细胞；所述待鉴定的干细胞，为来源于呼吸道的干细胞。

2.根据权利要求1所述的鉴定鼻黏膜基底层上皮干细胞的方法，其特征在于，步骤如下：

(一)向待鉴定的干细胞培养液中加入一抗，所述一抗包括SOX2抗体和SOX9抗体；

(二)洗去一抗，加入分别与SOX2抗体、SOX9抗体特异性结合的且带有荧光标记基团的二抗；

(三)洗去二抗，滴加抗淬灭封片剂并封片；

(四)荧光显微镜下观察并拍照；

(五)鉴定结果：通过荧光观察，若SOX2蛋白和SOX9蛋白同时表达，则表明该干细胞为鼻黏膜基底层上皮干细胞；若仅SOX2蛋白有表达，或仅SOX9蛋白有表达，则表明该干细胞不为鼻黏膜基底层上皮干细胞。

3.根据权利要求2所述的鉴定鼻黏膜基底层上皮干细胞的方法，其特征在于，所述步骤(一)～(三)的具体的操作如下：

(1)从培养箱中取出待鉴定的干细胞培养液，用PBS洗3次，每次5min；

(2)使用5ml的4％多聚甲醛溶液固定15min；

(3)弃去4％多聚甲醛溶液，加5ml的0.5％Triton X-100，通透15min；

(4)弃去0.5％Triton X-100，加5ml的5％山羊血清封闭液，封闭30min；

(5)弃去封闭液，滴加一抗，保湿盒中4℃过夜孵育；

所述一抗，包括SOX2抗体和SOX9抗体；

SOX2抗体，反应种属：Mouse，Rat，Human，宿主：Rabbit，使用浓度1:1000；

SOX9抗体，反应种属：Mouse，Rat，Human，宿主：Rabbit，使用浓度1:240；

(6)吸弃一抗，DPBS洗3次，每次5min；

(7)滴加二抗，避光，37℃，孵育1h；

所述二抗，包括Alexa Fluor 488和Alexa Fluor 594；

Alexa Fluor 488，反应种属：Mouse，宿主：Goat，使用浓度1:500；

Alexa Fluor 594，反应种属：Rabbit，宿主Goat，使用浓度1:500；

(8)弃去二抗，DPBS洗3次，每次5min；

(9)滴加抗淬灭封片剂并用盖玻片封片。

4.SOX2蛋白和SOX9蛋白在鉴定鼻黏膜基底层上皮干细胞中的应用。

5.SOX2蛋白和SOX9蛋白在制备鉴定鼻黏膜基底层上皮干细胞的检测试剂中的应用。

6.SOX2蛋白的抗体和SOX9蛋白的抗体在鉴定鼻黏膜基底层上皮干细胞中的应用。

7.SOX2蛋白的抗体和SOX9蛋白的抗体在制备鉴定鼻黏膜基底层上皮干细胞的检测试剂中的应用。