[发明专利]鉴定鼻黏膜基底层上皮干细胞的方法

说明书

本发明公开了一种鉴定鼻黏膜基底层上皮干细胞的方法：检测待鉴定的干细胞中SOX2蛋白和SOX9蛋白的表达情况，若SOX2蛋白和SOX9蛋白同时表达，则表明该干细胞为鼻黏膜基底层上皮干细胞；若仅SOX2蛋白有表达，或仅SOX9蛋白有表达，则表明该干细胞不为鼻黏膜基底层上皮干细胞；所述待鉴定的干细胞，为来源于呼吸道的干细胞。本发明通过实验研究，意外地发现，在鼻黏膜基底层上皮干细胞(近端干细胞)中存在SOX2和SOX9共同表达的情况，因此，检测SOX2、SOX9的表达情况，其结果可以用于鉴定鼻黏膜基底层上皮干细胞。本发明对鼻黏膜基底层上皮干细胞的研究、鉴定鼻黏膜基底层上皮干细胞等具有重要意义。

技术领域

本发明涉及一种鉴定鼻黏膜基底层上皮干细胞的方法，属于干细胞鉴定技术领域。

背景技术

呼吸道(respiratorytract)是人体直接对外界开放的器官之一，鼻腔气道上皮细胞作为呼吸道的门户是人体一道重要的生理防御屏障，在抵御病原微生物入侵及清除有毒物质等方面起着重要的作用。气道和呼吸肺泡源自原始内胚层的不同原基(buds)，即气管原基和肺原基，两个原基中含有不同的干细胞，分别称为近端(proximal)和远端(distal)干细胞。近端干细胞即是气道基底干细胞(Basal stem cells)，远端干细胞包括细支气管基底干细胞(Basal stem cells)、呼吸性细支气管与肺泡导管连接处(BADJ)的干细胞(bronchioalveolar stem cells，BASCs)以及肺泡Ⅱ型细胞。目前研究的共识是，沿着气道至肺分布着不同干细胞，他们具有区域性(region specific)，例如近端的气道干细胞不能分化成远端肺部的细胞，反之亦然，远端的干细胞也不能分化为气道细胞。

据相关文献报道，在生长发育过程中，伴随着分化，SOX2及SOX9两种蛋白也随之在呼吸道的不同部位表达。SOX2大多在呼吸道近端干细胞中表达，而SOX9仅在呼吸道的远端干细胞中表达。目前尚未见到关于SOX2及SOX9两种蛋白同时表达的相关报道。

发明内容

针对上述现有技术，本发明通过实验研究，意外地发现，在鼻黏膜基底层上皮干细胞(近端干细胞)中存在SOX2和SOX9共同表达的情况，因此，检测SOX2、SOX9的表达情况，其结果可以用于鉴定鼻黏膜基底层上皮干细胞。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种鉴定鼻黏膜基底层上皮干细胞的方法：检测待鉴定的干细胞中SOX2蛋白和SOX9蛋白的表达情况，若SOX2蛋白和SOX9蛋白同时表达，则表明该干细胞为鼻黏膜基底层上皮干细胞；若仅SOX2蛋白有表达，或仅SOX9蛋白有表达，则表明该干细胞不为鼻黏膜基底层上皮干细胞；所述待鉴定的干细胞，为来源于呼吸道的干细胞。

进一步地，步骤如下：

(一)向待鉴定的干细胞培养液中加入一抗，所述一抗包括SOX2抗体和SOX9抗体；

(二)洗去一抗，加入分别与SOX2抗体、SOX9抗体特异性结合的且带有荧光标记基团的二抗；

(三)洗去二抗，滴加抗淬灭封片剂并封片；

(四)荧光显微镜下观察并拍照；

(五)鉴定结果：通过荧光观察，若SOX2蛋白和SOX9蛋白同时表达，则表明该干细胞为鼻黏膜基底层上皮干细胞；若仅SOX2蛋白有表达，或仅SOX9蛋白有表达，则表明该干细胞不为鼻黏膜基底层上皮干细胞。

更进一步地，所述步骤(一)～(三)的具体的操作如下：

(1)从培养箱中取出待鉴定的干细胞培养液，用PBS洗3次，每次5min；

(2)使用5ml的4％多聚甲醛溶液固定15min；

(3)弃去4％多聚甲醛溶液，加5ml的0.5％ Triton X-100，通透15min；