[发明专利]一种牛多杀性巴氏杆菌荚膜A型ELISA抗体检测试剂盒及其制备方法和应用

说明书

本发明属于病原菌检测技术领域，具体涉及一种牛多杀性巴氏杆菌荚膜A型ELISA抗体检测试剂盒及其制备方法和应用。将序列如SEQ ID NO.1所示的基因整合到表达载体上并转入宿主菌；诱导宿主菌表达并纯化后获得序列如SEQ ID NO.2所示的PmA153重组抗原蛋白；将PmA153包被在固相载体上，即可通过酶联免疫吸附的检测方法实现对样品中的牛多杀性巴氏杆菌荚膜A型的抗体的检测，实现诊断目的。本发明提供的试剂盒，不使用多杀性巴氏杆菌作为抗原来源，具有良好的生物安全性及生产便宜性，对牛多杀性巴氏杆菌荚膜A型抗体检测具有良好的特异性，能够精准诊断牛多杀性巴氏杆菌荚膜A型肺炎，具有重要的临床应用价值。

技术领域

本发明属于病原菌检测技术领域，具体涉及一种牛多杀性巴氏杆菌荚膜A型ELISA抗体检测试剂盒及其制备方法和应用。

背景技术

牛多杀性巴氏杆菌(Pasteurella Multocida，Pm)荚膜B型是引起我国牛出血性败血症的病原菌。牛出血性败血症是以高热、肺炎、急性胃肠炎以及内脏器官广泛出血为特征的传染病，在我国已有几十年的流行历史，目前仍在多地呈散发或地方性流行。2008年，我国牛场出现了以纤维素性肺炎为典型症状的牛呼吸道传染病，并在黑龙江、甘肃、贵州、重庆、四川等数个省市流行。该病的临床表现以精神萎靡、食欲减退、咳嗽、流涕、体温升高和消瘦为特征。主要病理解剖变化在肺组织，呈广泛淤血和散在大小不一的脓肿结节，急性、亚急性或慢性的化脓性纤维素渗出与坏死，以及小叶间隔的水肿与化脓，严重者出现心包膜与胸膜粘连、纤维素性或化脓性胸膜炎。经哈尔滨兽医研究所等单位对数省市病料中的病原菌进行分离鉴定，并进行动物回归试验，确定了其病原菌为牛多杀性巴氏杆菌荚膜A型。

牛多杀性巴氏杆菌荚膜A型与B型有显著的不同，例如A型菌生长在牛的肺部，在病牛的血液中几乎无法检测出A型菌，因此无法使用PCR方法对采样的血清进行病原检测，ELISA抗体检测是首选的方法。可是由于牛多杀性巴氏杆菌荚膜A型的许多基因与B型有高度同源性，抗原有交叉反应，因此很难找到一个特异性的蛋白抗原进行ELISA检测。传统的包被抗原使用A型特异性的荚膜抗原，但荚膜抗原无法使用大肠杆菌等基因工程菌进行大量表达，需要用病原菌培养提取，不但产量低，还容易造成生物安全问题。且多糖的定量和包被都比使用基因工程表达蛋白困难得多。因此使用基因工程表达蛋白，比荚膜抗原更容易制备和生产ELISA抗体检测试剂盒。

发明内容

本发明意在提供一种牛多杀性巴氏杆菌荚膜A型ELISA抗体检测试剂盒，以解决现有技术中缺少针对于牛多杀性巴氏杆菌荚膜A型的且可以大量制备的特异性抗原的技术问题。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种牛多杀性巴氏杆菌荚膜A型ELISA抗体检测试剂盒，包括PmA153包被的固相载体；PmA153的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本方案还提供了一种抗原蛋白在制备特异性检测牛多杀性巴氏杆菌荚膜A型的试剂盒中的应用，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本方案还提供了一种牛多杀性巴氏杆菌荚膜A型ELISA抗体检测试剂盒的制备方法，包括PmA153包被的固相载体的制备步骤：

S1抗原蛋白的获取：将序列如SEQ ID NO.1所示的基因整合到表达载体上，获得重组质粒；将重组质粒转入宿主菌，诱导宿主菌表达抗原蛋白；再经菌体破碎、离心取上清以及纯化获得PmA153。

S2包被：配制含PmA153的包被液，使包被液于固相载体接触并孵育，再经封闭处理后，获得PmA153包被的固相载体。

本技术方案的原理以及优点在于：