[发明专利]DDM-FG复合物的制备方法及在骨移植材料上的应用

说明书

本发明公开了DDM‑FG复合物的制备方法及在骨移植材料上的应用，尤其将DDM‑FG复合物用于牙槽骨缺损骨移植修复中；本研究中FG的加入使得DDM不易松散移位，提高了DDM的可操作性，尤其是配比为1：0.5时，DDM‑FG具有优秀的塑形性。DDM组、1：0.1组、1：0.5组材料的孔隙率和体外降解率基本满足作为骨移植材料的需要。当配比为1：0.1的DDM‑FG与MC3T3‑E1共培养时促进细胞黏附的作用最优。不同配比DDM‑FG复合物促进MC3T3‑E1细胞成骨分化的能力优于DDM和FG，配比为1：0.1时对ALP活性的影响及矿化结节的形成作用明显，配比为1：0.5时促进OC分泌的作用明显。动物实验中，配比为1：0.5时成骨效果最明显。综上，当DDM的颗粒大小为400‑1000μm时，混合比例为1：0.5(g/ml)的DDM‑FG复合物更适用于临床。

技术领域

本发明属于骨移植材料技术领域的应用，具体涉及DDM-纤维蛋白胶复合物的制备方法及在骨移植材料上的应用。

背景技术

近年来，因外伤、感染、肿瘤术后造成的牙槽骨损伤，经常需要植入骨或骨移植材料。随着种植技术的日渐成熟，骨增量技术在种植修复中的应用越来越广泛，对骨移植材料的研究也越来越多。目前的骨移植材料有自体骨、同种异体骨、异种异体骨及异质骨。自体骨一般来源于髂骨、腓骨、肋骨、下颌骨甚至部分颅骨，因其具有骨传导性、骨诱导性及骨生成性，被认为是骨移植的“金标准”。同种异体骨来源于活体(截肢/假体置换术)或死者捐献，具有骨传导性，而骨诱导性较弱，临床上常用的有脱钙人骨。异种异体骨有牛骨、猪骨等，临床上常用脱钙小牛骨。异质骨有羟磷灰石、生物玻璃、磷酸钙等，虽来源广泛，但其只具有骨传导性。

脱矿牙本质基质(demineralized dentinmatrix，DDM)是将离体牙去除牙釉质，牙骨质和牙髓组织，对剩余的牙本质进行处理后而制成的天然复合物；DDM可释放骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein，BMP)、血管内皮生长因子(vascular endothelialgrowth factor，VEGF)、转化生长因子β(transforming growth factor-β，TGF-β)等多种生长因子，被认为是一种具有骨诱导作用的骨替代材料。

纤维蛋白胶(fibrin glue，FG)是在凝血级联的最后一步纤维蛋白原和凝血酶聚合形成的天然生物大分子材料。商用的FG也称为纤维蛋白粘合剂(fibrin sealant，FS)，是一种以纤维蛋白原和凝血酶为主要成分的自体或商用组织粘合剂。FG因其具有组织封闭、止血、促进伤口愈合及成胶稳定且迅速的功能，广泛应用于心脏手术止血、整形外科及烧伤治疗等。

针对DDM或FG的实验研究都表明DDM和FG均有良好的生物相容性，且可以作为骨形态蛋白BMPs及部分生长因子的载体，用于建立生长因子的缓释系统。研究显示DDM含有丰富的天然孔隙结构，这些孔隙有利于细胞生长因子和骨活性物质的聚集和进入。多种研究证明DDM可以释放多种生长因子，如骨形成蛋白BMPs,TGF-β，VEGF等，均有利于成骨。但是DDM存在所有骨粉都有的缺点，在局部应用时松散且易移位，不利于细胞迁移与血管新生，容易影响骨愈合。发明人通过研究发现，将DDM与FG以适当比例混合后，FG可以即刻成胶，DDM-FG成为类似粘性骨的骨移植材料(可以使用镊子夹取团块状粘性骨)使骨移植材料相对稳定地附着于骨缺损处，创造并维持新骨生成的空间，DDM可释放生长因子，如BMP,VEGF，TGF-β等，FG发挥生长因子的载体作用，可增加生长因子在局部释放的浓度，延长生长因子的释放周期，十分有利于骨愈合及新骨生成；DDM-FG复合物作为骨移植材料具有显著的临床应用价值和前景。

发明内容

为了将DDM-纤维蛋白胶复合物作为骨移植材料，本发明设计了DDM-纤维蛋白胶复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：取40周岁以下拔牙患者的无龋坏、无牙周病的因阻生或正畸需要而拔除的牙齿；