[发明专利]一种基于ATP生物发光的中药材中微生物总量快速检测方法

权利要求书

1.一种基于ATP生物发光的中药材中微生物总量快速检测方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)将待测中药材的校正集样品加入至缓冲液中，震摇、稀释后得到供试液，将供试液加入培养基中进行培养，然后计算供试液的微生物总量；

(2)将所述的步骤(1)中的供试液进行预增菌处理后，将菌液、助剂与荧光素酶制剂混合均匀后检测相对发光强度；

(3)以平均相对发光强度值或平均相对发光强度值的对数值为纵坐标，以所述的步骤(1)中得到的微生物总量的对数值为横坐标，绘制微生物含量分布图；

(4)以微生物限度为10-10⁶CFU/g划定纵向合格限，以误判率划定预警限；

(5)将待测中药材的测试集样品加入至缓冲液中，震摇、稀释后得到供试液，将所述的供试液按照步骤(2)所述的方法进行预增菌、检测相对发光强度，通过比对平均相对发光强度值与所述的预警限来判断检测结果是否合格，若平均相对发光强度值高于预警限，则判定测试样品不合格，若平均相对发光强度值低于预警限，则判定测试样品合格。

2.根据权利要求1所述的基于ATP生物发光的中药材中微生物总量快速检测方法，其特征在于：所述的步骤(4)中的预警限为预警上限和/或预警下限；所述的预警上限的误判率为5-10％；所述的预警下限的误判率为20-30％。

3.根据权利要求2所述的基于ATP生物发光的中药材中微生物总量快速检测方法，其特征在于：通过所述的纵向合格限与预警上限、预警下限在所述的微生物含量分布图中进行分区；所述的预警上限和预警下限之间的区域为预警区；所述的纵向合格限、预警下限、横坐标与纵坐标的合围区域为合格区，所述的纵向合格限与预警上限之间远离坐标轴原点的区域为不合格区，所述的纵向合格限、预警下限与横坐标大于纵向合格限的部分之间的区域及所述的纵向合格限、预警上限与纵坐标大于预警上限的部分之间的区域均为误判区。

4.根据权利要求1所述的基于ATP生物发光的中药材中微生物总量快速检测方法，其特征在于：所述的检测方法还包括如下步骤：以所述的步骤(1)中得到的校正集样品的微生物总量的对数值为纵坐标，以所述的步骤(3)中得到的校正集样品的平均相对发光强度值对应的微生物总量为横坐标，构建样品的单变量偏最小二乘回归模型，模型的评价指标包括决定系数R²、校正集均方根误差RMSEE和交叉测试集均方根误差RMSECV，将所述的步骤(5)中得到的测试集样品的平均相对发光强度值代入所述的模型中即可预判得到所述的中药材样品的微生物总量，并与合格限进行比较，低于合格限则判定样品合格，高于合格限则判定样品不合格。

5.根据权利要求1所述的基于ATP生物发光的中药材中微生物总量快速检测方法，其特征在于：所述的微生物为需氧菌、霉菌和酵母菌、大肠埃希菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、耐胆盐革兰阴性菌、白色念珠菌、梭菌中的至少一种。

6.根据权利要求1所述的基于ATP生物发光的中药材中微生物总量快速检测方法，其特征在于：所述的步骤(1)中的校正集样品与所述的步骤(5)中的测试集样品为同一产地、同一年份、同一批次、同一基源或同一采收部位的中药材样品；所述的校正集样品为随机选取的40-95％数量的中药材样品，所述的测试集样本为剩余的中药材样本。

7.根据权利要求1所述的基于ATP生物发光的中药材中微生物总量快速检测方法，其特征在于：所述的中药材为中药提取物、口服类中药饮片、泡服类中药饮片、煎煮类中药饮片或中药浸膏中的至少一种。

8.根据权利要求1所述的基于ATP生物发光的中药材中微生物总量快速检测方法，其特征在于：所述的中药材为柴胡、山药、当归、莲子、山楂、生姜、丹参、党参、甘草或金银花中的至少一种。

9.根据权利要求1所述的基于ATP生物发光的中药材中微生物总量快速检测方法，其特征在于：所述的步骤(2)中的预增菌步骤的时间为0.1-8h。

10.根据权利要求1所述的基于ATP生物发光的中药材中微生物总量快速检测方法，其特征在于：所述的步骤(2)中的助剂为十六烷基三甲基溴化铵与β-环糊精；所述的十六烷基三甲基溴化铵的浓度为2.5mmol/mL；所述的β-环糊精的浓度为3mg/mL；所述的荧光素酶制剂的浓度为3mg/mL；所述的步骤(2)中菌液、十六烷基三甲基溴化铵、β-环糊精与荧光素酶制剂的体积比1：0.1-2：0.2-0.8：0.3-1.6。