[发明专利]一种猪胚胎期毛囊基板前体细胞的鉴定方法及其应用

说明书

本发明涉及一种猪胚胎期毛囊基板前体细胞的鉴定方法及其应用，使用BMP7和TGFβ2作为猪胚胎期毛囊基板前体细胞的标记基因，所述鉴定方法为：将猪胚胎表皮细胞经免疫荧光染色，能够同时检测到BMP7和TGFβ2的细胞是毛囊基板前体细胞。所述猪胚胎为猪胚胎期37天及之前的胚胎。本发明提供了鉴定猪胚胎期毛囊基板前体细胞的关键基因标志基因BMP7和TGFβ2，可利用细胞免疫荧光检测技术，对猪胚胎早期皮肤细胞进行关键标志基因的表达检测，准确高效地筛选出毛囊基板前体细胞，为毛囊发育和再生研究提供一种具有研究价值的猪毛囊相关细胞系。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种猪胚胎期毛囊基板前体细胞的鉴定方法及其应用。

背景技术

人类对遗传性脱发和少发问题十分关注，毛囊（hair follicle，HF）形态结构和功能的稳定是毛发周期正常的关键。毛囊由多种类型的细胞构成，包括角质形成细胞、毛囊干细胞、生黑色素细胞、基底细胞、成纤维细胞和间充质细胞等，其结构复杂，遗传机制尚未完全解析。哺乳动物毛囊发育过程可分为出生前（胚胎期）毛囊形态学发育过程和出生后的周期性发育。胚胎期毛囊的发育是由上皮和间质细胞之间相互作用而产生的，解析胚胎期毛囊形态学发育过程是探究毛发发育和毛发相关复杂疾病的关键所在。在哺乳动物胚胎早期，来自真皮层的信号被认为是诱导表皮角质形成细胞呈直立状态激增的初始信号，在形态学上使得局部上皮细胞呈现聚集，增殖，向真皮内生长，称为毛囊基板（Placode，PC）。毛囊基板的形成是毛囊开始发育的重要形态学标志，决定了毛囊是否能正常形成和发育，同时毛囊基板的数量也决定了出生后的毛发密度。然而，对于毛囊基板形成之前的细胞和分子动力学仍然没有明确的定义。毛囊基板祖细胞的起源以及导致毛囊基板细胞的迁移和增殖的信号尚不清楚，需要更深入的研究。

由于人类毛囊样本，特别是胚胎期毛囊样本的紧缺性和伦理性，制约了对胚胎期毛囊基板形态学和发育机制的深入研究。猪作为人类毛囊发育的可用模型也受到越来越多的关注。猪与人类遗传同源性非常高，其基因组与人类基因组相似、复杂程度和染色体组成也较为一致，人和猪的皮肤在解剖和生理上也具有很高的相似性，我们先前的研究探索了猪的毛囊形态发生发展，相对于小鼠而言，猪在毛囊类型和毛囊形态发生模式上与人具有更高的相似性。然而猪毛囊基板形成过程中关键细胞亚型之间的信号相互作用仍然是未知的，目前尚无猪胚胎期毛囊基板前体细胞标记基因的报道。

发明内容

为了解决以上问题，本发明提出一种猪胚胎期毛囊基板前体细胞的鉴定方法，目的在于提供一种可靠的猪毛囊基板前体细胞的标记基因，可应用于毛囊发育相关研究。

本发明提供的猪胚胎期毛囊基板前体细胞的鉴定方法，使用BMP7和TGFβ2作为猪胚胎期毛囊基板前体细胞的标记基因，所述BMP7在NCBI数据库中的基因编号为492315，所述TGFβ2在NCBI数据库中的基因编号为397084，所述鉴定方法为：将猪胚胎表皮细胞经免疫荧光染色，能够同时检测到BMP7和TGFβ2的细胞是毛囊基板前体细胞。

所述BMP7 (Gene ID: 492315)和TGFβ2 (Gene ID: 397084)的基因序列可见Sscrofa11.1参考基因组(ftp://ftp.ensembl.org/pub/release-95/fasta/sus_scrofa/)。

进一步，所述猪胚胎为毛囊发育重要时期的猪早期胚胎，主要是指猪胚胎期37天及之前的胚胎。

本发明的猪胚胎期毛囊基板前体细胞的鉴定方法应用在毛囊发育研究中。本发明的有益效果如下：

1、本发明利用生信分析和分子实验验证，对猪胚胎早期皮肤毛囊发育细胞进行分析以明确猪胚胎毛囊发育的祖细胞起源，筛选出其关键标志物并进行表达检测，准确高效地筛选出毛囊基板前体细胞的重要标记基因BMP7和TGFβ2，为毛囊发育和再生研究提供一种具有研究价值的猪毛囊基板前体细胞关键标记物的筛选方法。