[发明专利]一种同时鉴定玉米禾谷镰孢穗腐病与多堆柄锈菌南方锈病抗性的方法

权利要求书

1.一种同时鉴定玉米禾谷镰孢穗腐病与多堆柄锈菌南方锈病抗性的方法，其特征在于，对待检测玉米品种的同一株苗接种两种病害，即按照玉米生长发育时期，在吐丝期先接种禾谷镰孢菌，5～10天后再接种多堆柄锈菌；分别采集玉米穗腐病和玉米南方锈病的发病状况数据，然后根据抗性等级划分标准进行发病状况的评价。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、种植鉴定材料；

S2、禾谷镰孢菌与多堆柄锈菌接种体的制备；

禾谷镰孢菌接种体：将强致病力禾谷镰孢菌菌株菌块接种到高压灭菌后的PDA固体培养基平板上，在25℃的暗培养箱中培养5～7天，菌丝布满平板后划成边长为1cm的小立方菌块，将5-6块菌块接种到绿豆汤培养基中，25℃、150r/min摇床震荡培养3～4天，过滤菌丝，收集孢子置于-20℃冰箱保存备用；接种时，将孢子配制成浓度约为1×10⁵个/mL的分生孢子悬浮液1；

多堆柄锈菌接种体：将田间发病的玉米南方锈病叶片取回室内，利用刀片将孢子刮下后放入2mL离心管，加入超纯水配制成浓度为1×10⁴～10⁵个/mL的孢子悬浮液2，加入吐温-20，使其在孢子悬浮液2中的质量浓度为0.01％，用于后续接种；提前播种感南方锈病玉米品种郑单958，置于温室培养，4～5叶期时接种孢子悬浮液2，接种后幼苗放置于黑暗、25℃的保湿箱12h，保湿完成后转移到温室培养，前3天每天喷水保湿1次，接种后10～15天见明显孢子堆，田间接种前收集病叶上的夏孢子；

S3、接种；

禾谷镰孢穗腐病接种：于玉米吐丝后3～5天，将制备的浓度为1×10⁵个/mL的分生孢子悬浮液1，加入吐温-20，使其在孢子悬浮液1中的质量浓度为0.01％，搅拌均匀，用注射器沿花丝通道注入玉米苞叶内的花丝丛中，每个雌穗注射接菌量为2mL，完成接种；

多堆柄锈菌南方锈病接种：上述接种过禾谷镰孢5～10天的玉米，将S2中温室培养的多堆柄锈菌玉米叶片用超纯水洗下夏孢子，配制成1×10 ⁴～10 ⁵个/mL的孢子悬浮液3，加入吐温-20，使其在孢子悬浮液3中的质量浓度为0.01％，利用电动喷雾器将孢子悬浮液3均匀的喷雾玉米叶片，完成接种；

S4、分别采集玉米穗腐病和玉米南方锈病的发病状况数据；

S5、抗性等级划分。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，S1的具体方法为：田块翻耕耙平后，每亩均匀撒施复合肥40～50kg，周围设置保护行，每个待检测品种种植行长5m，行距0.6m，株距0.25m，双粒播种，并以同样的方法播种4行抗、感对照，分别为玉米穗腐病的抗病对照为X178、感病对照B73、玉米南方锈病的抗病对照齐319、感病对照掖478，播种出苗后正常田间管理，试验点田间试验均采用完全随机区组设计。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，PDA培养基的配方为：将马铃薯洗净去皮、称取200g后切成小块，加入1000mL蒸馏水，煮沸20～30min，用纱布过滤去除残渣，滤液加入20g葡萄糖和15g琼脂，加蒸馏水定容至1000mL，分装锥形瓶，121℃高压蒸汽灭菌20min，取出后冷却贮存备用。

5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，绿豆汤培养基的配方为：称取50g饱满的绿豆，洗净后加入1000mL蒸馏水，煮沸20～30min，用纱布过滤去除残渣，加蒸馏水定容至1000mL，分装锥形瓶，121℃高压蒸汽灭菌20min，取出后冷却贮存备用。