[发明专利]一种胰腺癌类器官、培养基及培养方法

权利要求书

1.一种胰腺癌类器官培养基，其特征在于，包括基础培养和特异性添加因子，所述特异性添加因子包括如下终浓度的组分：

B27，1-5×；

EGF，10-100ng/ml；

Noggin，20-500ng/ml；

R-spondin 1，100-1000ng/ml；

Wnt3a，50-500ng/ml；

Igf 2，10-100ng/ml；

SB 505124，1-10μM；

SB 203580，1-10μM；

Y-33075，1-100nM。

2.根据权利要求1所述胰腺癌类器官培养基，其特征在于，所述基础培养基为AdvancedDMEM/F12。

3.根据权利要求1所述的胰腺癌类器官培养基，其特征在于，所述特异性添加因子包括如下终浓度的组分：

B27，1-3×；

EGF，20-60ng/ml；

Noggin，100-400ng/ml；

R-spondin 1，100-800ng/ml；

Wnt3a，100-400ng/ml；

Igf 2，40-80ng/ml；

SB 505124，1-5μM；

SB 203580，1-5μM；

Y-33075，20-60nM。

4.根据权利要求1所述的胰腺癌类器官培养基，其特征在于，所述胰腺癌类器官培养基的制备方法为将特异性添加因子添加到基础培养基中，混合均匀。

5.一种胰腺癌类器官的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)处理新鲜的胰腺癌样本获取细胞团；

2)将权利要求1～4任意一项所述的胰腺癌类器官培养基与基质胶混合得到混合液，用混合液重悬步骤1)获取的细胞团得到细胞悬液，将细胞悬液于培养皿中种胶滴；

3)将培养皿放入CO₂培养箱内静置，轻晃胶滴无明显流动后倒扣，待其充分凝固；

4)向培养皿中加入将权利要求1～4任意一项所述的胰腺癌类器官培养基，置于恒温培养箱在37℃，5％CO₂浓度下培养；每2～3天更换一次培养基，培养3～10天。

6.根据权利要求5所述的胰腺癌类器官的培养方法，其特征在于，步骤1)所述胰腺癌样本包括手术切除标本、活体组织或恶性积液样本；当处理的胰腺癌样本为手术切除标本或活体组织时，获取细胞团的方法为对样本进行预处理，预处理的方式包括洗涤、切碎、组织块消化、红细胞裂解以及过滤去除杂质；当处理的胰腺癌样本为恶性积液样本时，获取细胞团的方法为离心去除上清得到细胞团沉淀备用。

7.根据权利要求5所述的胰腺癌类器官的培养方法，其特征在于，步骤1)所述细胞团的细胞数量为3～100个。

8.根据权利要求5所述的胰腺癌类器官的培养方法，其特征在于，步骤2)中胰腺癌类器官培养基与基质胶的混合比例为1:0.8～3，重悬过程中细胞悬液中细胞浓度为10⁵～10⁷个/ml。

9.根据权利要求5所述的胰腺癌类器官的培养方法，其特征在于，步骤2)中一个胶滴为10～100μl细胞悬液。

10.一种胰腺癌类器官，其特征在于，采用权利要求1～4任意一项所述胰腺癌类器官培养基或使用权利要求5～9任意一项所述胰腺癌类器官的培养方法培养获得。