[发明专利]一种超低温保存自体颅骨方法

权利要求书

1.一种超低温保存自体颅骨方法，其特征在于，采用水提法制得三七/当归提取物，加入聚乙烯醇-海藻酸钠-聚丙烯酸水凝胶中，反复冻融，紫外线灭菌，冷冻干燥，制得改性水凝胶，然后将颅骨骨瓣剔除组织物，并洗净血迹浸泡在甘油溶液中，取出，表面均匀涂覆一层器官保存液，紫外线灭菌，得到预处理颅骨骨瓣，将预处理颅骨骨瓣预冷冻后，加入改性水凝胶中，超声波排气，阶段降温，然后放入液氮罐中储存。

2.根据权利要求1所述超低温保存自体颅骨方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.三七/当归提取物的制备：将三七、当归洗净、粉碎、干燥，得到中药粉，加入水中，加热提取，过滤，浓缩，冷冻干燥，得到三七/当归提取物；

S2.改性水凝胶的制备：将聚乙烯醇和海藻酸钠溶于水中，加入丙烯酸和碱溶液，然后加入步骤S1制得的三七/当归提取物、引发剂和N,N-亚甲基双丙烯酰胺，加热聚合，反复冻融，紫外线灭菌，冷冻干燥，制得改性水凝胶；

S3.预处理：将颅骨骨瓣剔除组织物，并洗净血迹，浸泡在甘油溶液中，取出，表面均匀涂覆一层器官保存液，紫外线灭菌，得到预处理颅骨骨瓣；

S4.预冷冻：将步骤S3制得的预处理颅骨骨瓣置于低温中预冷冻，制得预冷冻颅骨骨瓣；

S5.冷冻储存：在无菌条件下，将步骤S4中预冷冻颅骨骨瓣加入水中，加入步骤S2制得的改性水凝胶，充分溶胀，超声波排气，阶段降温至-70至-75℃，然后放入液氮罐中储存。

3.根据权利要求2所述超低温保存自体颅骨方法，其特征在于，步骤S1中所述三七、当归的质量比为3-5:2；所述中药粉和水的固液比为1:5-10g/mL；所述加热提取的温度为70-90℃，提取2-3h。

4.根据权利要求2所述超低温保存自体颅骨方法，其特征在于，步骤S2中所述聚乙烯醇、海藻酸钠、丙烯酸、碱溶液、三七/当归提取物、引发剂和N,N-亚甲基双丙烯酰胺的质量比为10-12:3-5:9-10:20-40:1-2:0.001-0.002:0.001-0.002；所述碱溶液为5-10wt％的NaOH或KOH溶液；所述加热聚合的温度为60-80℃，时间为1-2h；所述反复冻融为在-25至-20℃冷冻处理2-4h后，置于室温解冻4-5h，然后重复1-2次即可。

5.根据权利要求4所述超低温保存自体颅骨方法，其特征在于，所述引发剂选自过硫酸钠、过硫酸铵、过硫酸钾中的至少一种。

6.根据权利要求2所述超低温保存自体颅骨方法，其特征在于，步骤S3中所述甘油溶液的浓度为12-17wt％；浸泡时间为20-40min。

7.根据权利要求2所述超低温保存自体颅骨方法，其特征在于，步骤S4中所述低温为-10至-5℃，时间为1-2h。

8.根据权利要求2所述超低温保存自体颅骨方法，其特征在于，步骤S5中所述超声波排气的功率为1200-1500W，时间为20-30min；所述阶段降温的条件为每5min降温2-3℃。