[发明专利]一种高效低损伤组合式肿瘤组织消化液和应用

权利要求书

1.一种高效低损伤组合式肿瘤组织消化液，其特征在于：所述肿瘤组织消化液由A类模块消化酶、B类模块消化酶、C类模块消化酶、D类模块消化酶中的一种或多种组合而成；

所述A类模块消化酶由以下组分构成：Ⅱ型胶原酶50~200U/mL、透明质酸酶50~200U/mL、中性蛋白酶50~100U/mL，脱氧核糖核酸酶Ⅰ25~50U/mL、4-(2-氨乙基)苯磺酰氟盐酸盐0.1~1mM、马黛茶多糖乙酰氧基甲酯2~6mg/mL，黄芪甲苷20~50μg/mL、4-羟乙基哌嗪乙磺酸10~25mM、D-葡萄糖10~20mM、氯化钠90~110mM、氯化钾4~8mM、L-丙氨酰-L-谷氨酰胺1~2mM，甘氨酸0.1~0.3mM，pH缓冲对5~25mM，金属络合物0.1~15mM、灭菌超纯水和二甲亚砜溶剂；

所述B类模块消化酶由以下组分构成：Ⅳ型胶原酶100~400U/mL、半胱氨酸0.05~0.2mM、灭菌超纯水溶剂；

所述C类模块消化酶由以下组分构成：Ⅴ型胶原酶100~400U/mL、半胱氨酸0.05~0.2mM、灭菌超纯水溶剂；

所述D类模块消化酶由以下组分构成：弹性蛋白酶50~200U/mL、脱氧核糖核酸酶Ⅰ25~50U/mL、半胱氨酸0.05~0.2mM、灭菌超纯水溶剂。

2.如权利要求1所述的一种高效低损伤组合式肿瘤组织消化液，其特征在于：所述pH缓冲对由10~20mM的碳酸氢钠和 5~10mM的磷酸二氢钠构成；或所述pH缓冲对由10~20mM的磷酸氢二钠和10~20mM的磷酸二氢钠构成。

3.如权利要求1所述的一种高效低损伤组合式肿瘤组织消化液，其特征在于：所述金属络合物由0.5~5mM的枸橼酸钙和1~10mM的枸橼酸锰构成；或所述金属络合物由0.5~5mM的甘氨酸钙和0.5~5mM的枸橼酸镁构成；或所述金属络合物由0.5~5mM的枸橼酸钙、0.5~5mM的枸橼酸镁和0.5~2mM的甘氨酸锌构成。

4.如权利要求1所述的一种高效低损伤组合式肿瘤组织消化液，其特征在于：所述A类模块消化酶的pH在7.0-7.4。

5.如权利要求1所述的一种高效低损伤组合式肿瘤组织消化液，其特征在于：所述A类模块消化酶的制备方式如下：

S1、将Ⅱ型胶原酶、透明质酸酶、中性蛋白酶、脱氧核糖核酸酶Ⅰ、4-(2-氨乙基)苯磺酰氟盐酸盐、4-羟乙基哌嗪乙磺酸、D-葡萄糖、氯化钠、氯化钾、L-丙氨酰-L-谷氨酰胺、甘氨酸、pH缓冲对、金属络合物溶解于灭菌超纯水中；

S2、将马黛茶多糖乙酰氧基甲酯和黄芪甲苷溶于二甲亚砜；

S3、将步骤S1得到的溶液和步骤S2得到溶液混合均匀，调节pH至7.0-7.4，过滤得到A类模块消化酶；

所述B类模块消化酶的制备方式如下：将Ⅳ型胶原酶，半胱氨酸溶解于灭菌超纯水中，过滤得到B类模块消化酶；

所述C类模块消化酶的制备方式如下：将Ⅴ型胶原酶，半胱氨酸溶解于灭菌超纯水中，过滤得到C类模块消化酶；

所述D类模块消化酶的制备方式如下：将弹性蛋白酶、脱氧核糖核酸酶Ⅰ、半胱氨酸溶解于灭菌超纯水中，过滤得到D类模块消化酶。

6.一种高效低损伤组合式肿瘤组织消化液的应用，其特征在于：所述肿瘤组织消化液应用于肿瘤组织的消化，所述肿瘤组织包括间质细胞含量高于肿瘤细胞含量的肿瘤组织、间质细胞含量等于肿瘤细胞含量的肿瘤组织、间质细胞含量低于肿瘤细胞含量的肿瘤组织、离心后半透明胶质体积大于等于细胞沉淀体积2倍的肿瘤组织；

对于肿瘤组织包括间质细胞含量高于肿瘤细胞含量的肿瘤组织，采用仅由A类消化酶构成的肿瘤组织消化液消化；

对于间质细胞含量等于肿瘤细胞含量的肿瘤组织，采用由A类消化酶和B类消化酶构成的肿瘤组织消化液消化；

对于间质细胞含量低于肿瘤细胞含量的肿瘤组织，采用由A类消化酶和C类消化酶构成的肿瘤组织消化液消化；

对于离心后半透明胶质体积大于等于细胞沉淀体积2倍的肿瘤组织，其胶质采用仅由D类消化酶构成的肿瘤组织消化液消化。