[发明专利]磷脂酰胆碱在制备促进猪FAPs细胞分化聚脂制剂中的应用

说明书

本发明公开了磷脂酰胆碱在制备促进猪FAPs细胞分化聚酯制剂中的应用，属于农业与食品科学领域。本发明通过筛选多种脂质因子、植物活性成分得到可以有效促进猪FAPs细胞分化聚酯的制剂磷脂酰胆碱，并确定磷脂酰胆碱促进猪FAPs细胞分化聚酯的作用浓度；同时进一步在3D培养条件下验证其作用，可为优质细胞培养肉的高效生产、动物肌内脂肪的沉积调控提供新策略。

技术领域

本发明属于农业与食品科学领域，尤其涉及磷脂酰胆碱在制备促进猪FAPs细胞分化聚酯制剂中的应用。

背景技术

骨骼肌中的脂肪沉积尤其是肌内脂肪(IntramuscularFat,IMF)沉积与畜禽的肉质形成密切相关，其含量与猪肉的感官、食用品质密切相关，直接决定肉的风味、多汁性、嫩度、色泽等多个指标。近年来，国内外关于IMF沉积机制及其调控的相关研究已取得较大进展，但IMF的细胞来源及其靶向调控策略还需进一步研究。研究发现IMF细胞可由多种干细胞和祖细胞分化而来，如包括侧群细胞(Side population cells,SP cells)、周细胞(Pericytes)、多能间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)、肌卫星细胞(Musclesatellite cells muscle,SCs)、纤维脂肪生成祖细胞(Fibro/adipogenic progenitors,FAPs)等，其中FAPs特异性表达PDGFRα和Sca-1，是人和小鼠肌肉再生过程中主要细胞来源。FAPs能够向成脂和成纤维方向定向分化，进而导致肌肉中脂肪沉积和纤维化。因此，如何调控FAPs的分化潜能对于维持肌肉生长和稳态及调控肌内脂肪沉积具有重大意义。

目前关于FAPs分化调控的研究主要集中在人和小鼠上，尽管最近有猪肌肉单细胞测序论文注释到猪FAPs细胞，但尚未发现有FAPs体外培养、分化调控等论文报道。

目前猪FAPs相关研究处于起步阶段，缺少靶向调控其分化聚酯、调控肌内脂肪沉积的方法；目前培养肉生产的种子细胞主要利用肌卫星细胞，而单一细胞来源培养肉产品的营养成分和正常肌肉组织还要很大区别，其主要原因是肌肉组织包含多种细胞。

发明内容

本发明利用免疫磁珠分选技术分离得到猪FAPs细胞，初步建立了FAPs细胞体外2D/3D培养体系以及成脂诱导方法，但是仍然缺少通过营养策略靶向调控其成脂分化进而调控肌内脂肪沉积、改善猪肉品质的方法。本发明通过筛选多种脂质因子、植物活性成分得到可以有效促进猪FAPs细胞分化聚酯的制剂。

本发明提供了磷脂酰胆碱在制备促进猪FAPs细胞分化聚酯制剂中的应用。

优选地，所述制剂中磷脂酰胆碱单独作为有效成分。

更有选地，所述制剂中还包括辅料。

本发明还提供了一种细胞培养肉的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

(1)制备海藻酸钠/明胶3D凝胶球

将0.5g海藻酸钠和0.5g明胶溶于50mL蒸馏水中，得到浓度为2％的海藻酸钠-明胶溶液(海藻酸钠/明胶混合溶胶)。取1g氯化钙溶于50mL蒸馏水中，得到浓度为2％的氯化钙溶液。将海藻酸钠/明胶溶液逐滴加入氯化钙溶液，交联5-15min可得到海藻酸钠/明胶3D凝胶球；

(2)在海藻酸钠和海藻酸钠/明胶3D支架上接种FAPs细胞

在细胞培养板中加入氯化钙溶液，将猪FAPs细胞悬液与海藻酸钠/明胶混合溶胶按照体积比1：1～3混合均匀，逐滴滴入氯化钙溶液中，交联5-15min形成凝胶球；弃去剩余氯化钙溶液，补充生长培养基，在37℃、5％CO₂环境中培养，后进行成脂分化培养，成脂分化培养过程中添加1-100μM PC，最终获得细胞培养肉。

优选地，所述步骤(1)中还包括将海藻酸钠溶液、明胶溶液和氯化钙溶液分别于98℃下加热3h，紫外照射3h灭菌，氯化钙溶液经0.22μm滤膜过滤。