[发明专利]人NT-proBNP特异性单克隆抗体制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种人NT‑proBNP特异性单克隆抗体制备方法和应用。单克隆抗体具有抗原结合结构域，所述抗原结合结构域能够特异性结合NT‑proBNP的第66至76位氨基酸区域且不能结合proBNP，或者所述抗原结合结构域能够特异性结合NT‑proBNP的第5至27位氨基酸区域且还能特异性结合proBNP。相对于传统技术，本申请的有益效果包括：本申请提供的结合蛋白，其具有能够特异性结合NT‑ProBNP合适区域的抗原结构域，能用于准确检测出样品中的NT‑proBNP或者NT‑proBNP和proBNP。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种人NT-proBNP特异性单克隆抗体制备方法和应用。

背景技术

B型利钠肽(B-type natriuretic peptide，BNP)及其无活性同源片段—N末端B型利钠肽前体(N-terminal pro-B-type natriuretic peptide，NT-proBNP)是利钠肽(natriuretic peptides，NPs)家族中的一员。

人BNP编码基因(NPPB)的初始表达产物是proBNP前体(precursor pro-B-typenatriuretic peptide，pre-proBNP)，被信号肽酶剪切掉N端26个氨基酸成为proBNP，proBNP进一步被蛋白水解酶裂解为等摩尔两部分，并分泌到外周循环中：N端无生物学活性的直链NT-proBNP，即NT-proBNP1～76；C端具有生物学活性的环状BNP，即BNP1～32。NT-proBNP在体内的半衰期为90min，而BNP的半衰期仅有20min。

健康状态下，ANP是外周循环中主要的NPs，BNP浓度仅为ANP的1/10左右。而在缺血、应激及心室容积压力增大等病理状态下，BNP合成释放显著增加，成为外周循环中主要的NPs，如心衰患者BNP或/和NT-proBNP水平升高200～300倍，甚至更高。健康个体和患者间BNP或/和NT-proBNP水平的巨大差异使其成为心脏功能的理想指标。实际上，BNP已经在临床上应用超过20年，对疑似心力衰竭(简称：心衰)的诊断和预后评估具有重要价值，被多个临床实践指南作为Ⅰ级推荐。目前，NT-proBNP是心衰诊断与鉴别诊断的首选生物标志物，可以帮助临床医生管理心衰患者，既能用于心衰一级与二级预防，又可评估心衰患者的病情严重程度及预后，还可用于肺动脉高压、肺栓塞、冠心病及慢性肾病等患者的预后评估，亦用于非心脏手术患者术前及肿瘤患者化疗前的心血管风险评估。此外，BNP或/和NT-proBNP还可用于心血管疾病的一级预防。然而，BNP代谢过程复杂、检测结果影响因素众多，临床上BNP或/和NT-proBNP的检测结果应在特定临床背景下进行解释。

绝大多数NT-proBNP检测方法(包括商业化的检测方法)采用相同的抗体和校准品，但不同平台间仍有8％～23％的差异。NT-proBNP检测与proBNP存在交叉，但不与BNP交叉。这类检测方法检测的物质为NT-proBNP和proBNP混合物。并且，糖基化修饰对于识别NT-proBNP中心区的检测方法有负性影响，这类方法学仅能识别非糖基化的NT-proBNP和proBNP，但是无法识别糖基化的NT-proBNP和proBNP，可能导致NT-proBNP和proBNP真实水平被低估。如何实现NT-proBNP或其与proBNP的真实水平的检测，是亟待解决的技术问题。

发明内容

本申请实施例的主要目的包括提供一种单克隆抗体，其能特异性结合NT-proBNP或其与proBNP，采用该单克隆抗体对样品中的NT-proBNP或其与proBNP进行检测，能准确反映样品中NT-proBNP或其与proBNP的真实水平。

本申请的技术方案包括：

在本申请的第一方面，提供一种结合蛋白，其具有抗原结合结构域，所述抗原结合结构域能够特异性结合NT-proBNP的第66至76位氨基酸区域且不能结合proBNP，或者所述抗原结合结构域能够特异性结合NT-proBNP的第5至27位氨基酸区域且还能特异性结合proBNP。