[其他]稳定型γ-干扰素制剂的制备方法

说明书

本发明涉及一种γ干扰素制品。人体干扰素有三种，α、β及γ型。α及β型较稳定，临床主要用于非肠道给药，目前仍处于深入系统地临床研究之中。γ干扰素（此后简称IFN-γ）很不稳定，其水溶液在贮存、冷冻或冷冻干燥过程中活性容易下降，要得到适用于临床的稳定制品非常困难，有一系列的难题需要解决。γ干扰素抗肿瘤活性最强，一旦有了稳定的剂型，临床上将会广泛应用。

按照本发明，要使用的IFN-γ可以是任何衍生的人体γ干扰素，天然的或用再组合制得的，例如天然产生人体IFN-γ的浓缩物，亦即天然的IFN-γ（rIFN-γ）和再组合的IFN-γ（rIFN-γ），即通过人工培养由基因变换得到的能产生人体IFN-γ的微生物而制备出的含人体IFN-γ的物质（参见European    Patent    Publication    NO    0089676;Nucleic    Acids    Research    10，2487-2501，1982;Nature，295，503-508，1982;Nucleic    Acids    Research    10，3605～3615，1982〕。具体地说，前述r-IFN-γ包括由146个氨基酸组成的多肽（其氨基酸顺序见图1）以及多肽的各种（碎）片段，如氨基端空位片段和羧基端空位片段，氨基空位指多肽氨基端部缺少不足4个的氨基酸，这些片段也都是在多肽上第131个氨基酸以后的位置上，或者在氨基端空位的位置上分裂的。此外，r-IFN-γ还包括有多肽（和）被丝氨酸或苏氨酸取代了的属于多肽的半胱氨酸残余部分。

其中最宜使用含146个氨基酸的多肽和缺少Cs-Tr-Cs〔脱（Cs-Tr-Cs）IFN-γ〕的氨基端空位片段。

使用含人体IFN-γ浓度高的水溶液最为有利，高浓度可用基因再组合法做到。

人体IFN-γ的比活性最好要达到1×10⁵至1×10⁷国际单位/毫克（此后简写为IU/mg），水溶液的活性应达到1×10²至1×10⁷IU/ml，最宜为1×10⁴至1×10⁷IU/ml。

葡聚糖及羟乙基淀粉，可用市场买得到的产品。但是本发明的制品用于临床的品级，应当完全与制备非肠道用血浆代用品的品级相同。葡聚糖的平均分子量为10，000～100，000，最好为40，000～70，000;羟乙基淀粉平均分子量为10，000～200，000，最宜为20，000～60，000或200，000。

IFN-γ水溶液中葡聚糖及羟乙基淀粉浓度应在1mg/ml以上，最宜为3～50mg/ml。

除葡聚糖及羟乙基淀粉外，还可把人体血清白旦白（HSA）加到制品中，加入量最宜为2～20mg/ml    IFN-γ水溶液。

按照本发明，在人体IFN-γ水溶液中含有半胱氨酸残物时，此制品还可加入还原形硫化合物，如谷胱甘肽（已还原形）、硫辛酸、半胱氨酸、硫代二甘醇、硫代乙醇胺、单硫代甘油，二硫代苏糖醇及有1至7个碳原子的硫代链烷酸，其中以麸氨基硫（还原形）最宜。若允许共存时，这类还原形硫化合物最宜用量不低于0.1mg/ml，最好为0.5～10mg/ml    IFN-γ溶液。

还可添加一种或几种氨基酸作稳定剂，如甘氨酸、谷氨酸、α氨基丙酸、生理可接受的盐类及衍生物，单糖类如葡萄糖、果糖、甘露糖、半乳糖及双糖类，如蔗糖、麦芽糖及乳糖等，这些都有进一步改善稳定性的作用。当然，这些物质也可有挑选地组合。

上述稳定剂中，蔗糖效果较好，掺入量应为10～50mg/mlIFN-γ水溶液。

此制品还可进一步添加表面活性剂，如Tween-20，缓冲剂，等渗剂（isotonizing    agent）等。

按照本发明，人体IFN-γ制品为冷冻型或冷冻干燥型，可采用下述方法生产，例如，将葡聚糖或/及羟乙基淀粉加到含人体IFN-γ，浓度为1×10²至1×10⁷IU/ml的水溶液中，浓度达1mg/ml以上，最好为3～50mg/ml，亦可加入人体血浆白旦白（HSA）、蔗糖及其它剂。IFN-γ水溶液还可含有0.1mg/ml以上的还原硫化合物，最好为0.5～10mg/ml，及/或痕量表面活性剂，或者把还原形硫化合物及/或表面活性剂再加到这种溶液中，如前述稳定剂情况一样。