[发明专利]苏云金杆菌生物杀虫剂的固体发酵方法

说明书

本发明属于生物化学技术领域，具体地说是一种苏云金杆菌生物杀虫剂的固体发酵方法。

国内外凡工业规模生产苏云金杆菌生物杀虫剂，大都采用大罐液体发酵方法。液体发酵法能直接生产出液体制剂，经浓缩烘干后，成为可湿性粉剂，该法工艺成熟而稳定，是目前生产苏云金杆菌制剂的主要方法。但该法需要昂贵的设备，浓缩和干燥耗能很大，所以成本高，影响了推广和应用。另一种廉价的方法是固体发酵法。1963年美国的Mechalas最早用麸皮、谷糠等作为培养基，在大池内发酵，大规模生产苏云金杆菌制剂。该工艺的缺点是：培养基堆放过厚，发酵期内料温难以控制，通气不良和杂菌污染严重。未污染时，其产品的活孢子数一般只有30～150亿/克，毒力效价在1000IU/mg以下。后来不少专家对固体发酵工艺作了改进，现今采用的浅盘发酵工艺是应用的较多的方法。其工艺流程为：沙土管原菌种→试管斜面菌种→菌种扩大培养→培养基灭菌→接种→固体浅盘培养→烘干→磨细。用该法可以生产出活孢子含量为100亿～200亿/克，毒力效价在1500～3000IU/mg之间的粉剂。然而浅盘发酵工艺也存在着几点不足，由于该工艺均在自然环境中生产，温湿度受气候条件的影响较大，难以稳定地控制，杂菌污染时有发生，产品质量不够稳定。此外，培养基的厚度也难以选择，太厚，由于表面与内层通风状况不同，影响产品质量;太薄，产量又锐减。

本发明的目的是对现有固体发酵工艺进行改进，并创建一种新的苏云金杆菌生物杀虫剂的固体发酵方法，以克服现有技术的不足。

本发明的目的是通过下述固体发酵方法来实现的，该方法包括菌种培养、培养基灭菌、接种、浅盘培养、烘干、磨细，其特征在于：

a.接种前将培养基通过磁场进行磁化处理，

b.浅盘培养工序中，将培养基放在底部由多孔且通气的材料制成的浅盘中，

c.放于浅盘中的培养基厚度为2～7厘米，

d.将浅盘放在带有中空夹层结构的料架上，料架的上面板带有出气孔，夹层中通入无菌空气，

e.将料架放在密闭的发酵室中，室内的温度控制在20°～34℃，湿度控制在80%以上，发酵时间为36～48小时。

采用本发明的方法生产苏云金杆菌制剂，具有十分显著的优点，其发酵物的活孢子含量高达400～500亿/克;伴孢晶体量大且均匀，颗粒大而典型;干粉的毒力效价达8000～16000IU/mg。

本发明具有产量大、质量好、成本不高、工艺稳定、不易被杂菌污染等优点。

本发明也适用于其他生物杀虫剂、生物农药的工业规模生产。

本发明有如下附图：

图1工艺流程图

图2浅盘示意图

图3料架示意图

以下结合附图对本发明作详细描述。

图1为本发明工艺流程图。与现有的固体发酵方法相同，本发明包括菌种培养、培养基灭菌、接种、浅盘培养、烘干、磨细，具体方法如下：

1.菌种培养。该工序可以采用现有技术中的方法，依次经沙土管菌种、试管斜面菌种、菌种扩大培养，得到可用于接种的菌种。

2.培养基灭菌。培养基可采用以下材料（重量百分比）：棉子饼细粉25%、麸皮60%、谷糠10%、草木灰5%，均匀混合后加入无菌水，培养基与水的比例为1∶1.3。

培养基灭菌处理可采用高温100℃，处理30分钟即可。

3.培养基磁化。本发明在接种前增加了磁化工序，将培养基通过磁场进行一过性磁化处理，磁场强度为0.1～1.0特斯拉，作为三种实施方案，磁场强度可以分别为0.2、0.5、0.9特斯拉。

培养基集中磁化处理或装入浅盘后再进行磁化处理均可。

4.接种。

将培养基装入浅盘，浅盘底部采用通气的多孔材料制作，例如可以金属或塑料丝网制作，也可以采用竹篾编制，丝网的目数为20～200目，以不漏料且有较均匀的透气性为原则。现有技术中的装盘厚度为1.5厘米，本发明因采取了通气措施，装料厚度可为2～7厘米，这可以大大提高产量。浅盘示意图参见图2。

在80°～90℃的温度范围内将苏云金杆菌母液接种于培养基上。