[发明专利]从人血浆分部分离过程产生的馏分中回收免疫球蛋白的方法

说明书

本发明涉及免疫球蛋白制剂，并且更特别涉及一种生产一种高效价免疫球蛋白制剂的方法，此方法可用于从通常的血浆分部分离方法产生的馏分中回收免疫球蛋白，到目前为止，这种方法还不用于或至少尚未用于生产免疫球蛋白制剂。

在人血浆中有超过一百种不同的蛋白质。通过从供体血浆收集液中分部分离能够将它们中的一些纯化，并且用作如下实例的治疗产品：白蛋白用于在血蛋白过少或血容量减少中补偿肿胀缺陷；将凝血因子VIII和IX给药分别用作预防出血，并治疗血友病A和B；免疫球蛋白用作预防感染和治疗抗体缺乏疾病以及自发的血小板减少性紫癜；选自具有高效价特异性免疫球蛋白供体的免疫球蛋白用作超免疫球蛋白制剂，这些制剂用于预防和治疗诸如甲型肝炎或乙型肝炎这样的特异性感染。

例如，根据公知的乙醇分部分离方法，能够分离治疗用血浆蛋白质(Cohn，E.G.，等人，J.Am.Chem.Soc.，68，459，1946；Kistler，P.，和Nitschmann，H.，Vox Sang.，7，414，1962)。使用以上两种方法，能够分离大量的功能性血浆蛋白质，诸如白蛋白或免疫球蛋白，在适当的配方中，它们能够有利于临床应用。然而，当根据这些方法进行操作时，出现了沉淀物和/或上清液，它们不能在常规的工艺中使用。这些馏分的组合物变化很大。

另一方面，例如，在血浆与19％乙醇于pH5.8时的沉淀反应中，发现人阿朴脂蛋白A-1(apo A-1)在上清液中(约50％的血浆apo A-1)和在沉淀物A(约40％)中的份数近似相等，根据Kistler和Nitschmann的方法，在接下来的分部分离步骤后发现了相同的蛋白质，它们在那些到目前为止还没有在商业上使用的馏分中：沉淀物IV和沉淀物B(每种约40％)(Lerch等人，Protides of the BiologicalFluids，36，409，1989)。

对于铜结合蛋白质血浆铜蓝蛋白得到了类似的分布形式。分部分离后，发现20％的原材料在沉淀物IV中且40％的原材料在沉淀物B中。

一种血浆蛋白的实例是转铁蛋白，在相同的分部分离方法中，它基本上100％浓缩在沉淀物IV中，而发现80％的白蛋白在通常使用的沉淀物C中。

根据Kistler-Nitschmann或Cohn的分部分离方法，50-60％的免疫球蛋白可以从沉淀物GG中回收。在这些方法中，剩余的30-40％分布在沉淀物IV(5％)，沉淀物B(30％)和滤液GG(5％)中。

上述百分数用来说明分布大小的顺序并且不起限制作用；它们随条件和所用方法而改变。

这些实例表明，在有些情况中，在沉淀物IV，沉淀物B，上清液C和上清液GG的馏分中，或者根据Cohn的方法，在相应的血浆分部分离的馏分中(馏分IV-1，馏分II+III，上清液V和上清液II-1，2)，存在着相当一定数量的治疗用蛋白质。由于产品规格的原因，也由于世界范围的人血浆和某些血浆成分的短缺，所以应该在免疫球蛋白的生产上进行改进，到目前为止它们的产量还不是很高。

免疫球蛋白在防止感染中起着重要作用。病毒特异性中和抗体阻断病毒在细胞受体上的吸附并预防感染，而细菌特异性抗体调理病原体并通过中性白细胞和巨噬细胞将病原体消除和杀死。来自几千供体的血浆库含有许多不同特异性的免疫球蛋白，并且来自这样库中的免疫球蛋白制剂也因此含有可测定效价的免疫球蛋白，它们可直接抵抗病毒，细菌和毒素的表位。不可抵抗自身抗原。从而它们可有效地抵抗许多种感染以及在多数可变的其它病理条件下的感染。然而，目前在某些情况下，需要的是利用一种具有高效价特异抗体的免疫球蛋白制剂，一种所谓的超免疫球蛋白制剂，到目前为止，这种制剂是在消耗大量的时间和资金的情况下，从具有高效价特异性抗体的特定供体血浆库中制备出来的。由于各种原因，带来了许多困难。作为一种抗乙型肝炎的制剂来说，如果有认可的接种方法，那么必须接种和选择供体，且必须单独加工处理提供的血液。然而，由于许多其它的症状表现，考虑道德的原因，供体的免疫接种不能进行。这里几乎不可能通过一种对供体的相关性选择找到高效价的血液(例如，在供体从特定的疾病状况恢复之后)，并通过加工处理提供的血液而获得一种制剂。

因此，本发明的一个目的是提供一种回收免疫球蛋白的方法，通过该方法可以获得有价值的免疫球蛋白制剂，并且能够从到目前为止尚未被利用的上述馏分和沉淀物中分离这些免疫球蛋白，所述的馏份和沉淀物在工业血浆分部分离方法中可以获得。其后，应该有可能将这些制剂(相当于超免疫球蛋白制剂)加工成一种耐受性好，特别适用于静脉内(IV)的，防病毒的液体或冷冻干燥制剂。